ISSN:
1618-2650
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Chemistry and Pharmacology
Description / Table of Contents:
Summary The optical method of Otto Warburg as well as other physical methods like fluorimetry, polarimetry,ph-stat-titrimetry among others, are nowadays preferred for activity determination of enzymes. These procedures which can be facilitated by direct recording have the advantage of a continuous registration of a course of a reaction and a direct determination of enzyme activities. The application of such direct physical methods has been extended by Warburg by the preparation and application of pure enzymes, which can be used in coupled tests for a chemical coupling of an enzyme of unknown activity with a so called indicator enzyme, the activity of which can directly be measured. By use of another accessory enzyme, a three-fold analytical enzyme sequence can be developed. The theoretical basis for enzyme determination is the proportionality of reaction rate and enzyme concentration. According to the theory of Michaelis and Menten, proportionality can be found either with optimal substrate concentration, or with very small substrate levels, and furthermore, empirically by time measurement of a fixed substrate utilization. — The activity of enzymes is expressed for standard conditions in international units. An international unit is the amount of enzyme which catalyzes the reaction of 1 μMole substrate or 1 μEquivalent of a reacting group or split bondage, resp. the production of 1μMole product per minute.
Notes:
Zusammenfassung Die optische Methode von Otto Warburg sowie andere physikalische Meßverfahren wie die Fluorimetrie, die Polarimetrie, die Titrimetrie bei stationäremph (ph-Stat) und andere Methoden werden heute bevorzugt zur Aktivitätsbestimmung von Enzymen herangezogen. Diese Verfahren, durch Anschluß registrierender Schreiber erleichtert, haben gegenüber den klassischen chemisch-analytischen Verfahren den Vorteil einer fortlaufenden Darstellung des Reaktionsablaufes und gestatten eine einfache Ablesung der Aktivität eines Enzyms als Maß seiner katalytischen Wirksamkeit. Die Anwendung direkter Meßverfahren wurde von Warburg erweitert durch die Darstellung und Verwendung hochgereinigter, kristallisierter Enzyme, die in zusammengesetzten Tests zur chemischen Kopplung eines Enzyms unbekannter Aktivität an ein sogenanntes Indicator-Enzym eingesetzt werden, dessen Aktivität direkt gemessen werden kann. Durch Einschaltung eines weiteren Hilfsenzyms kann schließlich die analytische Enzymkette verdreifacht werden. Grundbedingung der Aktivitätsbestimmung ist die Proportionalität von Reaktionsgeschwindigkeit und Enzymkonzentration. Sie wird nach der Theorie von Michaelis und Menten entweder bei Substratüberschuß oder bei sehr kleinen Substratkonzentrationen, oder empirisch, unabhängig von dem Ordnungstyp der Reaktion, durch Zeitmessung eines festgelegten Substratumsatzes gefunden. Die enzymatische Aktivität wird für definierte Standardbedingungen in internationalen Einheiten ausgedrückt. Die internationale Einheit ist als die Enzym-Menge definiert, die die Umwandlung von 1 μMol Substrat oder 1 μÄquivalent einer reagierenden Gruppe oder gespaltenen Bindung bzw. das Auftreten von 1 μMol Produkt resp. μÄquivalent unter Standardbedingungen je Minute katalysiert.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF00491866
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