ISSN:
1432-119X
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Biology
,
Medicine
Description / Table of Contents:
Zusammenfassung Mit einer von Semm und Waidl (1962) angegebenen histochemischen Methode wurde versucht, die Serumoxytocinase in der menschlichen Placenta unter Verwendung von l-Cystin-di-β-Naphthylamid (CBNA) als Substrat nachzuweisen. Diese Methode war chemisch nicht realisierbar, da das vom Substrat abgespaltene β-Naphthylamin mit NaNO2 bei pH 4,9 diazotiert und anschließend mit N-1(Naphthyl)-äthylendiamin zu einem blauen Farbstoff gekoppelt werden soll. Eine Diazotierung kann in diesem pH-Bereich nicht erfolgen. Erst nach Senkung des pH unter 2,0 konnten die Versuche von Semm und Waidl nachvollzogen werden. Hinsichtlich ihrer Aussagekraft über die Histotopie des gesuchten Ferments waren sie jedoch unbefriedigend und von fehlerhaften Schlüssen abhängig. Mit der Methode nach Nachlas, Crawford und Seligman unter Verwendung des zwar unspezifischeren, dafür aber von der Serumoxytocinase zwanzigmal schneller als CBNA gespaltenen l-Leucin-β-Naphthylamid (LBNA) als Substrat gelang ein histochemischer Nachweis der Schwangerenserumoxytocinase. Durch Hemmung der Leucinaminopeptidase mit DL-Methionin und der Ocytocinase mit EDTA konnte nachgewiesen werden, daß es sich bei diesen Fermentaktivitäten zum größten Teil um die Serumoxytocinase handelt. Die Verwendung des weitaus spezifischeren Substrates CBNA führte nach allerdings längeren Inkubationszeiten zum selben Ergebnis: Es fand sich ein körniger Farbniederschlag im Trophoblasten und in den X-Zellen der Placentasäulen. Diese Strukturen können daher als Bildungsoder Speicherungsstätte der Oxytocinase angesehen werden.
Notes:
Summary The histochemical demonstration of oxytocinase in human placenta described by Semm and Waidl (1962) is based on the use of L-cystine-di-β-naphthylamide (CBNA) as a substrate for enzymatic cleavage, on diazotising the enzymically hydrolysed β-naphthalamine, and of the development of a blue color by coupling the diazocompound with N-1 (naphthyl)-ethylenediamine. Yet the method was not realisable chemically, because of the high pH during diazotising β-naphthylamine. After lowering the pH under 2,0 we succeeded in obtaining the results described by Semm and Waidl. They have to be regarded however as an artefact for tissue staining was of secondary nature. Diffusion of oxytocinase during incubation period lead to an enzymatic reaction within the solvent and not within the tissue as should be supposed. Following the method of Nachlas, Crawford and Seligman (1957) with L-leucine-β-naphthylamide (LBNA) as substrate we succeded in the real histochemical demonstration of oxytocinase. The cleavage of LBNA by oxytocinase proceeds twenty times faster than the cleavage of the more specific CBNA. Inhibition of Oxytocinase with EDTA was followed by a nearly complete loss of enzyme specific staining, inhibition of leucineaminopeptidase with D,L-methionine displayed no significant loss in enzyme activities. We can conclude therefore that these aminopeptidase activities being located in the trophoblast and in the X-cells of the human placenta are depending chiefly on oxytocinase.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF00309899
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