ISSN:
1432-1440
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Medicine
Description / Table of Contents:
Summary The kinetics of the red cell pyruvate kinase of a patient with non spherocytic hemolytic anemia, of two heterozygous family members and of healthy controls were studied before and after partial purification over DEAE and Sephadex G-100 chromatography. In the native hemolysate and in the hemoglobin-free eluate the Michaelis Constants for PEP and ADP, as well as the pH-Optima were determined. Furthermore, the specifity of the enzyme was tested against Coenzyme-Analogous comparing its activity with IDP, CDP and GDP instead of ADP. The Michaelis Constants for PEP and ADP, as well as the optimal pH and the determinations of Coenzyme-specifity did not show any significant difference between patient, heterozygous and normals. — Striking differences however were seen between the Michaelis Constants before and after purification resulting in a decrease of affinity towards PEP in the hemoglobin-free eluate, both, in patient's and normals' erythrocytes. This paradoxical behaviour was elucidated by the fact, that the optimal pH after purification was 6,7 instead of 7,2, at which pH all determinations originally had been performed. Repeated measurements of PK activity at this new optimal pH originated in values similar to those in crude hemolysate. From these results it seems most unlikely, that the pyruvate kinase deficiency hemolytic anemia is caused by an abnormal enzyme protein.
Notes:
Zusammenfassung Ausgehend von einem Knaben mit nichtsphärocytärer hämolytischer Anämie, bei welchem wir einen Pyruvat-Kinase-Mangel feststellen konnten, wurde die Erythrocyten-PK aller Familienmitglieder, darunter zweier Heterozygoter, bezüglich Enzymkinetik untersucht. Nach partieller Reinigung über Sephadex G-100 wurde die Michaelis-Konstante für PEP und ADP sowie die pH-Optima im rohen und gereinigten Hämolysat vergleichend bestimmt. Als weiteres wurde die Coenzymspezifität der PK vor und nach Reinigung gegenüber IDP, GDP und CDP von Gesunden mit derjenigen des Patienten und seiner Angehörigen verglichen. Weder Michaelis-Konstanten noch die pH-Optima noch die Coenzymspezifität der Erythrocyten des Patienten und der beiden Heterozygoten zeigten signifikante Unterschiede zu den Gesunden. Deutliche Differenzen ergaben sich jedoch zwischen den Michaelis-Konstanten für PEP vor und nach Reinigung des Enzyms im Sinne einer Abnahme der Substrataffinität nach der Reinigung. Es konnte nachgewiesen werden, daß dieses paradoxe Verhalten der Michaelis-Konstanten auf einer Änderung der pH-Optima durch die Reinigung beruht und daß, wenn die Michaelis-Konstanten für PEP beim neuen pH-Optimum nach der Reinigung gemessen werden, die Unterschiede wegfallen. Unsere Befunde wurden denen der Literatur gegenübergestellt. Die Normalwerte und die Spezifität der Enzymbestimmungsmethoden werden diskutiert.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF01745799
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