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Notizen: Echinocandin B (ECB), a lipopolypeptide used as a starting material for chemical manufacture of the anti-Candida agent LY303366, is produced by fermentation using a strain of Aspergillus nidulans. In addition to ECB, the wild-type strain also produces a significant level of sterigmatocystin (ST), a potent carcinogen structurally related to the aflatoxins. Characterization of a mutant designated A42355-OC-1 (OC-1), which is blocked in ST biosynthesis, was the result of a chromosomal translocation. The chromosomal regions containing the breakpoints of the translocation were isolated and DNA sequencing and PCR analysis of the chromosomal breakpoints demonstrated the translocation occurred within the stcW gene of the ST biosynthetic pathway, resulting in disruption of the open reading frame for this gene. Biochemical feeding studies indicate the involvement of this gene product in the conversion of averufin to 1-hydroxy versicolorone. This work demonstrates an effective synergy between classical strain improvement methods and molecular genetics. Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology (2000) 25, 333–341.

Notizen: Abstract An up to now unknown high “inner time precision” in isocratic gas chromatography (GC) and high pressure column liquid chromatography (HPLC) has been realized using quartz clock driven A/D converters and special statistically evaluating integration software. This millisecond level inner time precision is detectable by two very linear data correlations: a) the log of adjusted retention times (log(t R′)) versus the molecular weight of separated members of homologues and b) the peak width at half height versus correct k-values of the homologues. The inner time precision at the millisecond level is not lost by slight errors (up to seconds) in the starting times of GC or HPLC determinations. The correlation coefficient of the two linear data correlations allows a thorough analysis of instrument quality. The highly linear correlation of peak width and k in a wide range of mobile phase speeds is in disagreement with theoretical models of chromatography. Especially the rule of variance additivity is not valid in isocratic elution chromatography.

Notizen: Summary Capillary chromatography is important owing to its separating power, but much of this power is theoretical only because in current practice the separation efficiency theoretically possible, expressed in peaks separated per time unit or per “chromatographic unit” (i.e. k-units) is not yet even partially realized. A dramatic improvement would be possible, if we could learn to master the most important and basic parameter “bo”, the starting peak width, which is a time value. “bo”, the “slope a” (of peak width which increases with time) and the dead time “tm” are the three basic chromatographic parameters, independent of the substances being chromatographed. They build a complete “practically oriented theory”. Application of this theory ensures full optimization of the separation capillary, improvement of the instrument and technique used and the data handling. The theoretical background, experimental results, and the statistically based data handling for testing a capillary and independently, for testing an instrument, are given. Everything discussed here is based on the critical evaluation of the chromatogram and the use of small programmed pocket computers. It is shown that the theoretical or the effective plate number or the plate height data basically and principally cannot describe the separation efficiency in capillary chromatography because of incomplete correlation. Therefore three basic quantities, independent of the substances used and independent of each other are necessary to develop and describe critical quality data for testing and optimization of capillary chromatography. An improved plate height concept is useful but it is better to develop a best possible capillary and describe its true quality. This “real plate height” unit which is free from instrumental influences when measured experimentally, is defined and introduced in capillary chromatography. Dramatic improvements should be possible depending on how we can reach the theoretical limit of bo.

Notizen: Summary The separation number, TZ, is a practical measure of separation quality. TZ strongly depends on k. Sum of all TZ over the whole k-range divided by the uncorrected retention time tms of the last peak is a good measure of the separation power. The combined use of TZ and retention index data combines selectivity and separation quality in a simple and clear way. The aualitative range of a capillary column, open tubular or micro-packed, is at best expressed by the retention index range at the column temperature and is strongly dependent on the time of analysis. The acceptable temperature range of a capillary column, from far subambient to the acceptable upper limit can be simply expressed by computed data as well as the defined qualitative range. For the precalculation of both simple pocket computer programs are presented. The ‘four inlet-outlet-concept’ of gas chromatography columns (including capillaries) is discussed briefly; it offers new possibilities for analytical as well as quality check purposes, including accurate measurements of split ratios and flow rates; the tightness of the system under real life conditions can be measured by integrator, by on-line data acquisition systems as well as by hand. Sample transfer lines can simply be made as inactive as the most inactive glass capillary. This is important if we want to use the capillaries in our environment as instrument for quantitative analysis from 100 to 10−10% concentration by split or splitless injection and by capillary enrichment. Quantitative backflush and quantitative hinflush [8] or other new possibilities for capillaries, run in the four-inlet-outlet-mode, are discussed.

Notizen: Zusammenfassung Die richtige Beurteilung von Trennsäulen, Trenkapillaren, ihrer Anschlußqualität und der Art der Dosierung ist in der Gas-Chromatographie ebense bedeutend wie in den flüssig-chromatographischen Techniken HPLC und HPDC, wobei in der DC bzw. HPDC statt der Säulenqualität die Schichtqualität das Resultat der praktischen analytischen Arbeit bestimmt. Mit der klassischen theoretischen Trennstufenzahl oder der Bodenhöhe bzw. mit den effektiven Kennzahlen wie effektive Trennstufenzahl oder effektive Bondehöhe wird eine Mischwirkung aus der Qualität des Trennsystems, der Art des Anschlusses und der Art der Dosierung erfaßt. Deswegen sind diese Kennzahlen substanzabhänging und methodenabhängig. Das erlaubt keine kritisch gezeilte methodische Verbesserung und keine unabhängige sachgerechte Beurteilung. Die Verdienste der Theoretiker und Anwender der genennten klassischen Beurteilungsgrößen werden keineswegs geschmälert, wenn nun ein Beurteilungs-und Meßverfahren vorgeschlagen wird, das 1. Unabhängig von der Substanz bzw, ihrer chromatographischen Lage ist. 2. eine sachgerechte, das heißt reale Beurteilung des Trennsystems oder Schichtmaterials erlaubt, 3. eine davon getrennte quantitative Beurteilung und Messung von trenverschlechternden Wirkungen der Dosierung, Verbindung. Anschlüsse und Detektoreinflüssen auf das Trennresultat bietet und 4. eine reale Zusammenfassung beider Grundeigenschaften für das Trennvermögen und die Trennleistung erlaubt. Mit der realen Trenstufenzahl nreal der realen Bodenhöhe hreal der Dosierqualitätsgröße Qs der Trenzahl TZ10 der Trenleistungszahl TZt und der voneinander unabhängigen Optimierung auf maximale Trennung und höchste Informationsleisung bietet die neue Meß- undn Bewertungsmethode eine ausgesprochen gerechte vergleichende Beurteilung unterschiedlicher Trennsysteme in Gesamtgebiet der Chromatographie. Dazu werden drei bis acht Datenpaarre aus peakbreiten und (richtig gemessenen) Retentionswerten, sowie eine statistisch-mathematische Ausgleichsrechung oder eine zeichnerische Inter- und Extrapolation benötigt. Der Meß- und Rechenaufwand erfordert 5 Minuten Arbeitszeit und liefert fünf höchst aussagekräftige (bei entsprechendem Rechenaufwand auch statistisch gesicherte) Bewertungsgröße. Die Grundlagen dazu werden abgeleitet, Meß- und Berechnungsmethoden in Beispielen vorgestellt, Zeichen- oder Rechenmethoden (und zugehörige Programme für den Hewler-Packardrechner HP-65 und den Texas-Instruments-Rechner SR-52) angegeben sowie für den Fall der Gas-Chromatographie für klassicher gepackte Säulen, extrem kurze und lange mikrogepackte Säulen, Dünnschicht- und Dünnfilmkapillaren angewendet. In einem Teil 2 wird die ganze Methode auf die Breite der Flüssig-Säulen-Chromatographie und im Teil 3 auf die Schicht-Chromatographi sowie den Methodenvergleich angewendet. Der häufig gestellte Anspruch, wonach die theoretische Trennstufenzahl “theoretisch” von k abhängig sei und (in der GC) aus dem “Luftpeak” keine Aussagen auf die Chromatographiegüte gemacht werden können, wird als Interpretationsfehler oder als meßtechnisches “Mißverständnis” ausführich behandelt, damit auch die Grundlage des nauen Verfahrens klar mit den klassichen Verfahren verglichen und kritisch geprüft werden kann. Die Ableitungen sind so angelegt worden, daß auch der in der Chromatographie noch ungeübte Fachkollege die neue Methods sicher und richtig zu seinem eigenen Nutzen anwenden kann.

Notizen: Summary The basis of a procedure to measure, calculate and discuss true separation-quality indices is given and discussed. The procedure is simple and shows the most important role of components of the instrument and the technique used—optimization for different conditions, highest injection concentration per inlet volume prior to start of a separation—which are responsible for high separating efficiency and high separating power in all chromatographic techniques. The procedure allows a true comparison of separation methods and helps in the optimization of experimental work. This paper is a supplment to the green pages in Chromatographia9, 335 (1976) (German version) which will appear in English in a forthcoming issue.