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Matrix-bounded enzyme II: Potato phosphorylase entrapped in polyacrylamide gel after gel electrophoresis

Matrix-gebundenes Enzym II: Kartoffelphosphorylase, inkludiert in Polyacrylamidgel nach Gelelektrophorese

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Fresenius' Zeitschrift für analytische Chemie Aims and scope Submit manuscript

Zusammenfassung

Für die Hin- und Rückreaktion eines Phosphorylase-Isozyms wird geprüft, welchen Einfluß Substrat, Primer, Temperatur, pH-Wert und Lagerungszeit haben, wenn das Enzym nach der PAA-Elektrophorese im Gel verbleibt und erneut mit PAA umhüllt wird. Die Inklusion geschieht in Würfelchen von 3 mm3.

Als Vergleich wird das nach der PAA-Elektrophorese eluierte Enzym in freier Lösung herangezogen, dessen Aktivität in 280 h auf 7% abgesunken ist, während das inkludierte Enzym noch bei 95% liegt. Zerkleinerung und damit Erhöhung der Oberfläche um den Faktor 200 gibt keine Verbesserung der Umsatzrate, es geht im Gegenteil ein erheblicher Teil der Enzymaktivität verloren.

Summary

The starch synthetic and degradative action of potato phosphorylase insolubilized by entrapping in a net work of polyacrylamide (PAA), after PAA gel electrophoresis has been investigated. Optimum results for the second polymerization were obtained by 6% Cyanogum® with 5% cross linking (BIS). The enzyme shows a very high degree of storage stability, compared to the free enzyme. In addition, optimum pH, temperature, effect of particle size and porosity of the gel have also been studied.

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  1. R. Garadi

    Present address: , 5648 Bonner Drive, 76148, Fort Worth, Texas, USA

  2. V. Shankar

    Present address: Dept. of Pharmacology, Baylor College of Medicine, Texas Medical Center, 77025, Houston, Texas, USA

  3. K. N. Shivaram

    Present address: Berufsgenossenschaftliche Krankenanstalten Bergmannsheil Bochum, Hunscheidtstr. 1, D-4630, Bochum, Federal Republic of Germany

Authors and Affiliations

  1. Institut für Biochemie, Biologische Bundesanstalt, Braunschweig

    R. Garadi, V. Shankar, K. N. Shivaram & H. Stegemann

Authors
  1. R. Garadi
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  2. V. Shankar
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  3. K. N. Shivaram
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  4. H. Stegemann
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Part I: Z. Anal. Chem. 263, 27 (1973).

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Garadi, R., Shankar, V., Shivaram, K.N. et al. Matrix-bounded enzyme II: Potato phosphorylase entrapped in polyacrylamide gel after gel electrophoresis. Z. Anal. Chem. 277, 197–201 (1975). https://doi.org/10.1007/BF00462237

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