Zusammenfassung
In caseinhaltigen Agarosegelen erzeugen sowohl Pepsin wie Chymosin radiale Diffusionszonen, deren Durchmesser bei gegebener Zeit dem Logarithmus der Enzymmenge proportional ist. Die Bestimmungsgrenze liegt für beide Enzyme unter 1 μg. Bei Zugabe des Inhibitors Pepstatin A zu den Proteinasepräparaten werden die Diffusionszonen beider Proteinasen verkleinert, aber in unterschiedlichem Ausmaße. Auf dieser Basis kann in technischen Labpräparaten das Mengenverhältnis Pepsin/Chymosin mit einer Genauigkeit von ±5% bestimmt werden. Bei Umkehr der Reaktion zum Nachweis des Inhibitors sind Mengen im Bereich von 10−9 Mol sicher erfaßbar. Die Methodik ist verallgemeinerungsfähig als Screening-Test für Proteinaseinhibitoren.
Summary
In casein-containing agarose gels, pepsin and chymosin form radial diffusion zones; the diameters of these zones show rectilinear correlations with the logarithm of the enzyme concentration at constant time. The sensitivity for both enzymes is below 1 μg. Addition of the inhibitor pepstatin A to these enzymes causes a reduction of the diameters of the diffusion zones, with large differences for both the enzymes. With this procedure, the pepsin/chymosin ratio in rennet preparations was assayed with an accuracy of ±5%. Identification of the inhibitors allows the determination of amounts in the namomole range. This method is a simple technique for the evaluation of proteinases and their inhibitors in screening systems.
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Takahashi, F., Reimerdes, E.H. & Klostermeyer, H. Gel diffusion—A simple and sensitive technique for the assay of proteinase inhibitors and its use for the determination of the ratio of proteinases in mixtures. Z Lebensm Unters Forch 164, 163–166 (1977). https://doi.org/10.1007/BF01263023
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DOI: https://doi.org/10.1007/BF01263023