Studies on in vitro carcinogenesis

Summary

The incorporation of radioactive labelled Methylcholanthrene into CBA/T₆T₆ mouse embryonic fibroblast cultures was studied by using light and electronmicroscopic autoradiographic and also liquid scintillation counting techniques. During 24 hrs treatment time at the applied Methylcholanthrene concentrations (0.01–2.5 μg/ml) the proportion of cells labelled with ³H-Methylcholanthrene and the number of grains above the cells showed a relationship with the duration of treatment and also with the doses. Up to 24 hrs all cells were labelled after treatment with 2.5 μg/ml whereas at 0.01 and at 0.1 μg/ml concentrations Methylcholanthrene could have been detected only 2 and 10% of the cell population resp. The presented results suggested that labelling index reached saturation level earlier than the average number of grains. Electronmicroscopic autoradiography revealed a rather even distribution of grains and there were no signs for preferential binding site of Methylcholanthrene. Biochemical separation showed that 59 and 44% of the radioactivity was bound to macromolecules at 1 and 24 hrs after commencing treatment resp.

Zusammenfassung

Der Einbau von radioaktiv markiertem Methylcholanthren wurde autoradiographisch (Licht-und Elektronenmikroskopie) und mit der Liquid-Szintillationsmethode untersucht. Nach 24 stündiger Behandlung mit einer Methylcholanthren-Konzentration von 0,01–2,5 μg/ml stehen die Zahlen der markierten Zellen und auch die Silberkornzellen in Korrelation mit der Behandlungszeit und mit den angewandten Dosen. Nach Behandlung mit 2,5 μg/ml Methylcholanthren sind alle Zellen markiert, bei 0,01 und 0,1 μg/ml nur 2 bzw. 10% der Zellpopulation. Diese Ergebnisse weisen darauf hin, daß der Markierungsindex früher 100% erreicht als das bei der Durchschnittszahl der Silberkörner zu erwarten ist. Die elektronenmikroskopische Autoradiographie zeigt eine ziemlich gleichmäßige Verteilung der Silberkörner und keine bevorzugte Bindungsstelle des Methylcholanthrens. Durch biochemische Analysen wird gezeigt, daß 1 Std und 24 Std nach Beginn der Behandlung 59 bzw. 44% der Radioaktivität an die Makromoleküle gebunden ist.