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Untersuchungen über die pH-Abhängigkeit, Hemmbarkeit und Reaktivierbarkeit von Angiotensin II-amid-spaltenden Aminopeptidasen menschlicher Erythrozyten

Studies on the pH-dependence, inhibition and reactivation of angiotensin II-amide splitting enzymes in human erythrocytes

  • Published:
Research in Experimental Medicine

Summary

Aminopeptidase activity of three fractions of human erythrocytes (membranes free of hemoglobin; hemolysate free of membranes; enzyme protein fraction made free of hemoglobin by DEAE-cellulose) was measured by a NADH dependent optical test using asparaginyl1-angiotensin II-amide as substrate.

  1. 1.

    From the enzyme protein fraction 6 subfractions were obtained by (NH4)2SO4 precipitation. By measuring enzyme kinetics at three different pH-values (pH 5,0; 7,0; 8,0) with and without addition of the effectors Na2EDTA and Ca++ the existence of 6 different enzymes could be demonstrated.

  2. 2.

    The aminopeptidase activity of the hemolysate made free of membranes could be inhibited by diisopropylfluorphosphate and p-chloromercuribenzoate at three different pH-values (pH 5,0; 6,5; 7,0; 8,0 and 6,5; 7,0; 8,0 respectively).

  3. 3.

    A reduction of enzymatic activity of 20% was found after incubation at 37°C for two hours.

Zusammenfassung

In menschlichen Erythrozytenfraktionen (hämoglobinfreie Erythrozytenmembranen; membranfreies Hämolysat; durch DEAE-Cellulose von Hämoglobin befreite Enzym-Protein-Fraktion) wurde mit Hilfe eines NADH-abhängigen optischen Tests mit Asparaginyl1-Angiotensin II-amid als Substrat die Aminopeptidaseaktivität untersucht.

  1. 1.

    Durch fraktionierte Ammoniumsulfatfällung wurden sechs Unterfraktionen aus der Enzym-Protein-Fraktion gewonnen. Mit Hilfe von enzymkinetischen Untersuchungen bei drei verschiedenen pH-Werten (pH 5,0; 7,0; 8,0) mit und ohne Zusatz von zwei verschiedenen Effektoren (Na2EDTA und Ca++) gelang der Nachweis von sechs verschiedenen Enzymen.

  2. 2.

    Durch die Inhibitoren Diisopropylfluorphosphat und p-Chloromercuribenzoat wurde bei verschiedenen pH-Werten (pH 5,0; 6,5; 7,0; 8,0 bzw. 6,5; 7,0; 8,0) eine signifikante Inaktivierung der Aminopeptidaseaktivität des membranfreien Hämolysats beobachtet.

  3. 3.

    Das Temperaturoptimum für die Aminopeptidaseaktivität des Hämolysats lag bei 47°C. Bei 37°C trat nach einer Inkubation von 2 Stunden ein Aktivitätsverlust von 20% ein.

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Authors and Affiliations

  1. I. Medizinische Klinik und Poliklinik Institut für Medizinische Statistik und Dokumentation, Johannes-Gutenberg-Universität Mainz, Langenbeckstraße 1, D-6500, Mainz, Germany

    H. P. Nast, A. Distler, D. Müller, G. Kantarcioglu, U. Walter & H. P. Wolff

Authors
  1. H. P. Nast
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  2. A. Distler
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  3. D. Müller
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  4. G. Kantarcioglu
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  5. U. Walter
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  6. H. P. Wolff
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Nast, H.P., Distler, A., Müller, D. et al. Untersuchungen über die pH-Abhängigkeit, Hemmbarkeit und Reaktivierbarkeit von Angiotensin II-amid-spaltenden Aminopeptidasen menschlicher Erythrozyten. Res. Exp. Med. 168, 89–100 (1976). https://doi.org/10.1007/BF01851898

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