Differenzierte Auswertung des Metopirontests durch Dünnschichtchromatographie

Zusammenfassung

Die Beurteilung des Metopirontests durch Bestimmung der Gesamtcorticosteroidausscheidung ist in Grenzfällen auch nach getrennter Bestimmung der polaren und apolaren Steroide durch Lösungsmittelverteilung schwierig. Es wird eine dünnschichtchromatographische Fraktionierung durch mehrfache Entwicklung eines Urinextraktes in 5 Lösungsmitteln aufsteigender Polarität aufeiner Kieselgelplatte angegeben. Nach Eluierung einer THF+THE-Fraktion sowie einer THS-Fraktion wird der Gehalt an reduzierenden Steroiden semiquantitativ mit Blautetrazolium bestimmt. Die Ergebnisse der Auswertung nach Lösungsmittelverteilung und nach Dünnschichtchromatographie werden bei 15 unausgewählten Metopirontests mitgeteilt. In 7 der 15 Tests war der geforderte 2,5fache Anstieg der Porter-Silber-Chromogene nicht erreicht worden. In 3 Fällen (supra-sellärer Tumor, M. Addison) war die Ursache des pathologischen Testausfalls offensichtlich. In 2 Fällen mit primärer Hypothyreose ließ erst die differenzierte Auswertung die ausreichende Stimulierung aufgrund des starken Anstiegs der THS-Fraktion erkennen. Bei 2 Kindern mit M. Cushing mit sehr frühem Krankheitsbeginn konnte durch die differenzierte Bestimmung das Ausbleiben der corticotropen Stimulation trotz ausreichender Blockade der 11-Hydroxylase nachgewiesen werden. Es wird empfohlen, die Lösungsmittelverteilung in jedem Fall zur Auswertung des Tests zu benutzen. In Grenzfällen, in denen das Ausmaß der Blockade und der Grad der adrenocorticotropen Stimulierung genauer beurteilt werden soll, ist die dünnschichtchromatographische Auftrennung nützlich, da die Trennung exakter ist.

Summary

The evaluation of the metapyrone-test by estimation of the total 17-hydroxy-corticosteroids may be difficult in some cases even after separation of polar and less polar compounds by solvent distribution. For these cases a simple differentiation by thin-layer-chromatography gives more information. The urinary extracts are fractionated by repeated development in five solvent-systems of ascending polarity on the same plate. The THF+THE-fraction (=cortisol-metabolites) and the THS-fraction (=11-deoxycortisolmetabolites) are eluted, the amounts of reducing steroids are estimated by the blue-tetrazolium reaction. The results of 15 metapyrone-tests estimated by solvent-distribution compared with those estimated by thin-layer-chromatography are reported. In 7 cases the 2.5-fold increase of Porter-Silber-chromogen excretion, as parameter of normal function of the adrenocortical stimulation, was not achieved. In 3 of these cases the reason for pathological reaction was evident (suprasellar tumour, M. Addison). In 2 cases with primary hypothyroidism the increase of Porter-Silberchromogenes was lower, but solvent-distribution and thin-layer-differentiation demonstrated a high increase of 11-deoxysteroids, thus demonstrating a normal adrenocortical stimulation. Two children with M. Cushing (onset of disease: 3 and 5 years) failed to show the usual high increase of Porter-Silber-chromogenes. As it became evident especially from chromatographic separation, inhibition of 11-hydroxylase was obvious but further stimulation was not achieved, for the excretion of 11-deoxymetabolites did not surmount the total production before inhibition. It is recommended to use a solvent-distribution for evaluation of the metapyrone-test in any case. In tests with insufficient increase of steroid excretion a separation by thin-layer-chromatography is more indicative.