Nachweis Ferritin-gekoppelter Antikörper im Agargel

Summary

The demonstration of antigen-antibody precipitations following agar gel diffusion depends on the concentrations of antigen or antibody in the specimen. Small quantities of antigen can only be detected if the sensitivity of the method is increased by marking the antibodies. Ferritin was used as a marker for the antibodies; the single iron molecules are enlarged 100 000 times by the sulphide-silver-reaction and thereby made visible. The sulphide-silver-reaction made it possible to stain precipitation lines in dried agar gel preparations. The method is superior compared to other published data on the analysis of ferritin-antibody conjugates. The sensitivity of the antigen determination is increased for about 3–4 titer steps of dilution. Quantities of antigen can in this way be detected which are otherwise not demonstrable by conventional staining methods.

Zusammenfassung

Dem Nachweis von Antigen-Antikörperpräcipitaten im Agargel sind Grenzen gesetzt, die sich vor allem aus der Konzentration des Antigens in der Untersuchungsprobe ergeben. Geringe Antigenmengen, die bei Anwendung der üblichen Färbemethoden nicht sichtbar werden, lassen sich nur darstellen, wenn die Nachweisempfindlichkeit durch Markierung von Antikörpern gesteigert wird. Als Marker von Antikörpern wurde von uns Ferritin Verwendet, dessen Eisenanteil durch Silberanlagerung (Sulfid-Silber-Reaktion) mit einem Vergrößerungseffekt von mehr als 100 000:1 sichtbar gemacht werden kann. Die Sulfid-Silber-Reaktion ließ sich an luftgetrockneten Agargelpräparaten gut ausführen. Sie eignet sich zur Kontrolle der Ferritinbindung an Antikörper besser als alle früheren Verfahren. Sie führt gleichzeitig zu einer Steigerung der Nachweisempfindlichkeit von Präcipitaten im Agargel. Die bei Routinefärbungen gefundene untere Nachweisgrenze kann um 3–4 Verdünnungsstufen weiter gesenkt werden. Mit Hilfe der Sulfid-Silber-Reaktion lassen sich demnach Antigenmengen erfassen, die dem üblichen Nachweisverfahren entgehen.