Summary
Rat liver cells have been isolated by extracorporal liver perfusion using an enzymefree or enzyme containing perfusion medium. The vitality of the liver cells has been studied by the trypan-blue-technique, by FDA, by phase contrast microscopy and by the luciferin-luciferase-test. Furthermore the ATP ratio of the liver cells and their spontaneous ATP — as well as spontaneous51Cr release have been measured.
Enzyme prepared liver cells had vitality criteria only a few hours after the isolation when studied by the trypan-blue or FDA technique. Using these methods it was impossible to define the vitality of enzymefree prepared cells. In contrast to these results the phase contrast microscopy and the luciferin-luciferase-test demonstrated, that enzymefree prepared liver cells fullfill vitality criteria longer and in a higher percentage compared with enzyme prepared hepatocytes.
The ATP ratio of enzyme prepared liver cells was significantly higher. The spontaneous ATP release of both cell preparations was 1 ng pro 1 × 106 cells/ml. The51Cr release of isolated liver cells was about 50% of the primary bound activity.
The investigations show what kind of method may be suitable to measure quantitativelyin vitro damages of liver cells induced by immune reactions.
Zusammenfassung
Rattenleberzellen wurden mittels extrakorporaler Leberperfusion unter Verwendung eines Hyaluronidase-Kollagenase-haltigen bzw. enzymfreien Perfusionsmediums isoliert. Die isolierten Leberzellen wurden auf ihr Verhalten gegenüber Trypanblau, FDA, in der Phasenkontrastbetrachtung und im Luciferin-Luciferase-Test untersucht. Darüber hinaus wurde der ATP-Gehalt der Zellen sowie die spontane Abgabe von51Cr aus markierten Zellen bestimmt.
Mit der Trypanblau- und der FDA-Technik zeigen enzympräparierte Zellen für einige Stunden Vitalitätsmerkmale, nicht hingegen enzymfrei präparierte Zellen. Im Gegensatz dazu erfüllen in der Phasenkontrastbetrachtung und im Luciferin-Luciferase-Test enzymfrei präparierte Leberzellen Vitalitätskriterien länger und in einem höheren Prozentanteil als enzympräparierte Zellen.
Der ATP-Gehalt der enzympräparierten Zellen liegt signifikant höher verglichen mit enzymfrei präparierten Zellen. Die spontane ATP-Freisetzung aus isolierten Rattenleberzellen beträgt bei 1 × 106 Zellen pro Milliliter weniger als 1 ng/ml.51Cr wird von markierten Rattenleberzellen innerhalb von 5 Std bis zu 50% der primär gebundenen Aktivität abgegeben.
Die Ergebnisse gestatten eine Aussage darüber, welche dieser Methoden sich für eine quantitative Erfassung immunologisch bedingterin vitro-Schädigungen von Leberzellen eignet.
Similar content being viewed by others
Literatur
Berry, M. N., Friend, D. S.: High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells. J. Cell Biol.43, 506 (1969)
Brunner, K. T., Mauel, J., Cerottini, J. C., Chapuis, B.: Quantitative assay of the lytic action of immune lymphoid cells on51Cr-labelled allogeneic target cells in vitro; inhibition by isoantibody and by drugs. Immunology14, 181 (1968)
East, A. G., Louis, L. N., Hoffenberg, R.: Albumin synthesis by isolated rat liver cells. Exp. Cell Res.76, 41 (1973)
Fong, R., Kissmeyer-Nielsen, F.: A combined dye exclusion (trypan blue) and fluorochromatic technique for the microdroplet lymphocytotoxicity test. Tissue Antigens2, 57 (1972)
Henney, C. S.: Studies on the mechanism of lymphocyte-mediated cytolysis. J. Immunol.1, 73 (1973)
Hopf, U., Meyer zum Büschenfelde, K. H.: In Vorbereitung
Hopf, U., Meyer zum Büschenfelde, K. H., Freudenberg, J.: Liver specific antigens of different species. II. Location of a membrane antigen at cell surfaces of isolated hepatocytes. Clin. exp. Immunol.16, 117 (1974)
Howard, R. B., Pesch, L. A.: Respiratory activity of intact, isolated parenchymal cells from rat liver. J. biol. Chem.243, 3105 (1968)
Howard, R. B., Christensen, A. K., Gibbs, F. A., Pesch, L. A.: The enzymatic preparation of isolated intact parenchymal cells from rat liver. J. Cell Biol.35, 675 (1967)
Jeunet, F., Quitt, J.: Perfusion du foie isolé: Technique et applications. J. Physiol.54, 625 (1962)
Kissmeyer-Nielsen, F., Kjerbye, K. E.: Lymphocytotoxic micro-technique. Purification of lymphocytes by flotation. Histocompatibility testing, S. 381. Copenhagen: Munksgaard 1967
McElroy, W. D., Seliger, H. H., White, E. H.: Mechanism of bioluminescence, chemiluminescence and enzyme function in the oxidation of firefly luciferin. Photochemistry10, 153 (1969)
Meyer zum Büschenfelde, K. H., Hopf, U.: Liver specific antigens of different species. I. Isolation and further characterization. In Vorbereitung
Seglen, P. O.: Preparation of rat liver cells. I. Effect of Ca2+ on enzymatic dispersion of isolated, perfused liver. Exp. Cell Res.74, 450 (1972)
Sheffield, J. B., Emmelot, P.: Studies on plasma membranes XVI. Tissue specific antigens in the liver cell surface. Exp. Cell Res.71, 97 (1972)
Weigand, K., Müller, M., Urban, J., Schreiber, G.: Intact endoplasmic reticulum and albumin synthesis in rat liver cell suspensions. Exp. Cell Res.67, 27 (1971)
Author information
Authors and Affiliations
Additional information
Auszugsweise vorgetragen auf dem Deutschen Internistenkongreß Wiesbaden 1973.
Mit Unterstützung durch die Deutsche Forschungsgemeinschaft (Me 244/6) + SFB 107.
Rights and permissions
About this article
Cite this article
Hopf, U., Meyer zum Büschenfelde, K.H., Groth, U. et al. Zur Vitalitätsprüfung isolierter Rattenleberzellen. Res. Exp. Med. 163, 199–209 (1974). https://doi.org/10.1007/BF01851667
Received:
Issue Date:
DOI: https://doi.org/10.1007/BF01851667