Improvement of renin determination in human plasma using a commonly available renin standard in a radioimmunological method

Zusammenfassung

Es wird eine neue Methode zur Messung von Renin in menschlichem Plasma beschrieben. Die Methode basiert auf der Einführung des Renin-Standards des Medical Research Council (MRC), London als Eichsystem und vermeidet damit die prinzipiellen Nachteile von Verfahren, die Renin nur als Angiotensinbildungsgeschwindigkeit erfassen. Prinzip der Methode ist es, Standard- und Plasma-Renin während der Enzymreaktion (mit Schafsubstrat) und während des Angiotensin I-Radioimmunoassays (RIA) identisch zu behandeln. Die Plasma-Renin-Konzentration (PRC) wird in 10⁻⁶ MRC-Renineinheiten (µU/ml) angegeben. Ergebnisse: Der Renin-Standard ist stabil und frei von Angiotensin, Angiotensinasen und Angiotensinogen. Er zeigt gleiche Enzymcharakteristika wie Plasma-Renin. Eine Interferenz von endo- und exogenem Substrat konnte vermieden werden. Mögliche, gravierende Störungen des RIA durch Proteine der Enzymreaktionsansätze wurden nachgewiesen. Eine Eichung über einen Angiotensin I-Standard kann vermieden werden. Bei Anwendung einer Standard-Renin-Verdünnung von 0,9–250 µU/ml wird nahezu der gesamte biologische Bereich erfaßt. Unter freier Kost betrugen die vorläufigen Normalwerte für 30–35jährige in Ruhe 21,9±12,6 µU/ml, nach Orthostase 40,1±18,8 µU/ml (x±s,n=16). Frühere Beobachtungen über eine Altersabhängigkeit der PRC wurden bestätigt.

Summary

A new method for the measurement of renin in human plasma is described. The method is based on the introduction of the internationally available renin standard of the Medical Research Council (MRC) London, as a calibration system. Thus, some principal disadvantages of methods expressing results in renin reaction velocity (angiotensin generation rate) only are avoided. Both renins, unknown and standard, react with a sheep substrate preparation and are handled identically throughout the whole procedure including the angiotensin I radioimmunoassay (RIA). The plasma renin concentration (PRC) is given in 10⁻⁶ MRC-renin units (µU/ml). Results: the renin standard is free of angiotensin, angiotensinases, and angiotensinogen; it is stable on storage. Identical enzyme kinetics are shown for both renins. An interference between endogenous and exogenous substrate could be avoided. The potentially harmful influences of proteins from the enzyme incubation mixture on the RIA dose response curve are shown. The use of an angiotensin I calibration system could be omitted. Using a standard renin dilution from 250–0.9 µU/ml almost the full biological range is covered. When giving an unrestricted diet the preliminary normal values of PRC are 21.9±12.6 µU/ml in recumbent and 40.1±18.8 µU/ml in upright position (n=16,x±s, age 20–35 years). Earlier findings of age-dependancy of PRC were confirmed.