Immunchemische Bestimmung des Haselnußproteins mit Hilfe der Elektroimmundiffusion nach Laurell

Summary

An electro-immuno-assay was worked out for the determination of hazelnut protein in some products like chocolate, hazelnut purée and nut-nougat-cremes. During the investigations, an optimal procedure for defatting and extraction was identified. The most suitable defatting agent for nut cremes was acetone, the most suitable buffer combination tris-tricine resp. tris-borate. Urea depending on its molarity, decreased the amounts of protein in the extracts, down to 15% of the original value.

The standard curve of the isolated hazelnut protein (corylin) when using the lowest amount of antiserum 0.1 ml per 15 g agarose per plate extents from 0.01–0.1%. The rate of error (3 s,n=10, double estimation) was found to be ±6.8%, for products of commerce ±7–9%. The recovery in all products was greater than 95% ± 8%.

The identity of proteins as compared with the standard protein was evaluated by the double-gel diffusion method of Ouchterlony and the modified electro-immuno-assay of Laurell. With increasing roast temperatures, the values of intact protein decrease. These results will be shown in the subsequent paper.

Zusammenfassung

Zur Bestimmung von Haselnußprotein in Haselnüssen und verschiedenen Schokoladenwaren wie Schokolade, Haselnußmus und Nuß-Nougat-Creme wurde eine Elektro-Immunobestimmung nach Laurell ausgearbeitet. Dabei wurde ein optimales Entfettungs- und Extraktionsverfahren ermittelt, in dem die Eignung verschiedener Lösungsmittel und Puffersysteme geprüft wurde. Als schonendstes Entfettungsmittel haben sich Aceton und als beste Puffer Tris-Tricine und Tris-Borat erwiesen. Harnstoff setzt die Ausbeute an intaktem Protein je nach Molarität bis auf 15% herab.

Die Eichkurve des isolierten Standards (Corylin) umfaßt bei sparsamster Verwendung des Antiserums einen Bereich von 0,01–0,1 %, mit jeweils einem statistisch ermittelten Fehler von ±6,8% (3-s-Wert); bei Handelsprodukten liegt er je nach Art zwischen ±7% bis ±9%. Die Wiederfindungsrate lag bei allen Produkten über 95% ± 8%.

Die Identität der gefundenen Proteine gegenüber dem Standard konnte mit der Geldiffusion nach Ouchterlony und mit einer modifizierten Laurell-Technik gesichert werden. Die erhaltenen Ausbeuten an intaktem Protein gehen mit steigendem Röstgrad zurück. Doch selbst bei einer Rösttemperatur von 150 °C und 30 min läßt sich noch intaktes Haselnuß-protein nachweisen.