Zur Vitalitätsprüfung isolierter Rattenleberzellen

Summary

Rat liver cells have been isolated by extracorporal liver perfusion using an enzymefree or enzyme containing perfusion medium. The vitality of the liver cells has been studied by the trypan-blue-technique, by FDA, by phase contrast microscopy and by the luciferin-luciferase-test. Furthermore the ATP ratio of the liver cells and their spontaneous ATP — as well as spontaneous⁵¹Cr release have been measured.

Enzyme prepared liver cells had vitality criteria only a few hours after the isolation when studied by the trypan-blue or FDA technique. Using these methods it was impossible to define the vitality of enzymefree prepared cells. In contrast to these results the phase contrast microscopy and the luciferin-luciferase-test demonstrated, that enzymefree prepared liver cells fullfill vitality criteria longer and in a higher percentage compared with enzyme prepared hepatocytes.

The ATP ratio of enzyme prepared liver cells was significantly higher. The spontaneous ATP release of both cell preparations was 1 ng pro 1 × 10⁶ cells/ml. The⁵¹Cr release of isolated liver cells was about 50% of the primary bound activity.

The investigations show what kind of method may be suitable to measure quantitativelyin vitro damages of liver cells induced by immune reactions.

Zusammenfassung

Rattenleberzellen wurden mittels extrakorporaler Leberperfusion unter Verwendung eines Hyaluronidase-Kollagenase-haltigen bzw. enzymfreien Perfusionsmediums isoliert. Die isolierten Leberzellen wurden auf ihr Verhalten gegenüber Trypanblau, FDA, in der Phasenkontrastbetrachtung und im Luciferin-Luciferase-Test untersucht. Darüber hinaus wurde der ATP-Gehalt der Zellen sowie die spontane Abgabe von⁵¹Cr aus markierten Zellen bestimmt.

Mit der Trypanblau- und der FDA-Technik zeigen enzympräparierte Zellen für einige Stunden Vitalitätsmerkmale, nicht hingegen enzymfrei präparierte Zellen. Im Gegensatz dazu erfüllen in der Phasenkontrastbetrachtung und im Luciferin-Luciferase-Test enzymfrei präparierte Leberzellen Vitalitätskriterien länger und in einem höheren Prozentanteil als enzympräparierte Zellen.

Der ATP-Gehalt der enzympräparierten Zellen liegt signifikant höher verglichen mit enzymfrei präparierten Zellen. Die spontane ATP-Freisetzung aus isolierten Rattenleberzellen beträgt bei 1 × 10⁶ Zellen pro Milliliter weniger als 1 ng/ml.⁵¹Cr wird von markierten Rattenleberzellen innerhalb von 5 Std bis zu 50% der primär gebundenen Aktivität abgegeben.

Die Ergebnisse gestatten eine Aussage darüber, welche dieser Methoden sich für eine quantitative Erfassung immunologisch bedingterin vitro-Schädigungen von Leberzellen eignet.