Die Bestimmung freier und gebundener methylierter Nucleobasen in Lebensmitteln

Zusammenfassung

Zur qualitativen und quantitativen Bestimmung der methylierten Purin- und Pyrimidinbasen in Lebensmitteln wurde eine Methode entwikkelt und exemplarisch einige RNA-reiche Lebensmittel untersucht. Die Basen aus Nucleinsäuren, Nucleotiden und Nucleosiden ließen sich durch Hydrolyse mit einem Trifluoressigsäure-Ameisensäure-Gemisch (1/1, V/V) in einem Druckaufschlußsystem bei 240°C freisetzen. Durch Festphasenextraktion mit einer Octadecyl-und einer Kationenaustauscherphase gelang die Reinigung und Fraktionierung der Hydrolysate. Die Bestimmung der Major- und methylierten Nucleobasen erfolgte mittels Ionenaustauschchromatographie und Reversed-Phase-HPLC.

Summary

The following method was developed for the qualitative and quantitative determination of methylated purine and pyrimidine bases in food; some RNA-rich food was also investigated. The bases were liberated from nucleic acids, nucleotides, and nucleosides by acid hydrolysis with trifluoroacetic and formic acid (1/1, V/V) at 240°C in a pressure-digestion system. Purification and fractionation of hydrolysates were achieved by sorbent extraction with an RP 18 column and a cation exchange column. The major and methylated nucleobases were determined by ion-exchange chromatography and reversed-phase-HPLC.