ISSN:
1432-1440
Keywords:
Pankreashormone
;
Radioimmunologische Bestimmung
;
Radioimmunoassay
;
Pancreatic Hormones
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Medicine
Description / Table of Contents:
Summary Synthetic human C-peptide bearing a Tyrosine group at its amino end is labelled with125iodine using chloramin T or hydrogen peroxide and lactoperoxidase. The results are compared applying both methods. Antiserum to synthetic human C-peptide (without Tyrosine) which was partially coupled to rabbit albumin, is raised in guinea pigs and goats. Goats show to be superior to guinea pigs concerning antibody production. The so-called “hook effect” phenomenon is observed in setting up the standard curves for the radioimmunoassay. Monotonically decreasing standard curves are obtained on dilution of antiserum with a high antibody titer which was produced by repeated immunization in goats. Free C-peptide and C-peptide bound to antiserum are separated with the anion exchange resin Amberlite. Using this separation technique we excluded unspecific binding of labelled C-peptide to protein fractions in serum of diabetics. The sensitivity of our radioimmunoassay is approx. 0.3 ng C-peptide/ml serum. Intra- and interassay variability are below 10%. Human proinsulin is the only substance found to crossreact with the antiserum.
Notes:
Zusammenfassung Synthetisches humanes C-Peptid mit einer Tyrosin-Gruppe am Aminoende wird unter Einsatz von Chloramin T oder von Wasserstoffperoxid und Lactoperoxidase mit125Jod markiert. Die mit beiden Methoden erzielten Ergebnisse werden verglichen. Antiserum gegen synthetisches humanes C-Peptid (ohne Tyrosin), das zum Teil an Kaninchenalbumin gekoppelt wurde, wird in Meerschweinchen und Ziegen erzeugt. Ziegen eignen sich zur Antikörperbildung besser als Meerschweinchen. Bei der Herstellung von Standardkurven für den Radioimmunoassay tritt das sogenannte „hook effect“ Phänomen auf. Durch Verdünnen von Antiseren mit hohem Antikörpertiter, die nach wiederholtem Immunisieren bei Ziegen gewonnen wurden, gelingt es Standardkurven mit monotonem Abfall zu erhalten. Freies und an Antikörper gebundenes C-Peptid werden mit Hilfe des Anionaustauscher Harzes Amberlite getrennt. Durch Anwendung dieses Trennverfahrens wird eine unspezifische Bindung von markiertem C-Peptid an Eiweißfraktionen in Diabetikerseren ausgeschlossen. Die Empfindlichkeit unseres Radioimmunoassays beträgt ungefähr 0,3 ng C-Peptid/ml Serum. Intraund Interassayvariabilität liegen unter 10%. Eine Kreuzreaktion mit unserem Antiserum wird nur für humanes Proinsulin gefunden.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF01470462
