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    Springer
    Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurgie 2 (1998), S. 141-145 
    ISSN: 1434-3940
    Keywords: Schlüsselwörter Konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie ; Knochen ; Histotomographie ; Key words Confocal laser scanning microscopy ; Bone ; Histotomography
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Medicine
    Description / Table of Contents: Objectives: Fixation (formalin), decalcification (sections) or mechanical treatment (grinding) all bear the risk of artifacts occurring during hard-tissue histology. Because studies on the etiology of pathological changes mostly focus on subclinical lesions, artifacts can simulate early changes or even be superimposed on existing changes. The objective of this study was to determine how artifacts can be reduced. Material and methods: In confocal laser scanning microscopy (CLSM) a focused laser beam scans the surface of the specimens and penetrates into the tissue. The intensity of the remitted light is recorded. The confocal effect is due to an extremely small aperture (pinhole), excluding light from out-of-focus planes of the sample. By stepwise movement of the object table, a tomographic series of tomographic images is obtained. Sound cortical bone samples of the lower jaw (n = 20) were studied by light microscopy and by CLSM, visualizing identical areas of a ground sectioned sample after H & E staining. Additionally, embedded and fresh blocks of tissue of the same bone sample were studied histotomographically in the CLSM. Results: (1) Light microscopic micromorphology of cortical bone can be visualized adequately in the CLSM; (2) many structures that can be visualized by light microscopy only after special staining (e.g., osteozyte processes) can be visualized by the CLSM using sample blocks without pretreatment. Conclusion: (1) Nondestructive subsurface histotomography by CLSM totally excludes mechanical artifacts; (2) physicochemical artifacts can be handled more easily because fresh samples can be studied; (3) pseudo-three-dimensional imaging allows histological interpretation of the tissue that is equivalent to macroscopic tomographic techniques (CT, MRT).
    Notes: Durch Fixierung (Formalin), Entkalkung (Schnitte) oder mechanische Bearbeitung (Schliffe) besteht bei der Hartgewebshistologie das Risiko physikalisch-chemischer oder mechanischer Artefakte. Da Studien zur Ätiopathogenese pathologischer Veränderungen meist auf subklinische Läsionen zielen, besteht die Gefahr, daß Artefakte frühe Veränderungen vortäuschen oder vorhandene überdecken. Es wird der Frage einer artefaktminimierten Histologie nachgegangen. Bei der konfokalen Laser-Scanning-Mikroskopie (CLSM) rastert ein monochromatischer Laserstrahl über die Probenoberfläche und dringt in das Gewebe ein. Die Intensität der remittierten Strahlung wird in einem Detektor gemessen. Durch eine konfokale Blende (pinhole) erreicht nur Laserlicht aus einer extrem dünnen In-Fokus-Ebene den Detektor, so daß schrittweises Bewegen des Objekttischs eine tomographische Serie von Einzelbildern visualisiert. Gesunde kortikale Knochenproben des Unterkiefers (n = 20) wurden durchlichtmikroskopisch und im CLSM untersucht: Dabei wurden identische Probenareale an Dünnschliffen nach HE-Färbung visualisiert. Außerdem wurden eingebettete und frische Gewebeblöcke derselben Knochenproben im CLSM histotomographiert. Als Ergebnisse wurden gefunden: 1. Lichtmikroskopische Mikromorphologie kortikalen Knochens ist im CLSM valide visualisierbar. 2. Viele lichtmikroskopisch erst nach Spezialfärbungen darstellbare Strukturen (z.B. Osteozytenfortsätze) können im CLSM an Probenblöcken ohne Vorbereitung mikroskopiert werden. Hieraus können folgende Schlußfolgerungen gezogen werden: 1. Die zerstörungsfreie Histotomographie des CLSM unter der Probenoberfläche vermeidet mechanische Artefakte völlig. 2. Physikalisch-chemische Artefakte werden kontrollierbar, da auch frische Proben mikroskopiert werden können. 3. Die pseudo-dreidimensionale Darstellung erlaubt eine histologische Gewebeinterpretation, die makroskopischen Schichtbildverfahren (CT, MRT) vergleichbar ist.
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 2
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    Springer
    Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurgie 3 (1999), S. 92-97 
    ISSN: 1434-3940
    Keywords: Schlüsselwörter Ca-P-Keramiken ; Knochenersatzmaterialien ; Röntgendiffraktometrie ; Kristallisation ; Key words Calciumphospate ceramics ; Bone regeneration materials ; X-ray diffractometry ; Cristallisation
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Medicine
    Description / Table of Contents: Introduction: The crystalline structure of hydroxyapatite (HA) and tricalciumphosphate (TCP) used as bone regeneration materials affects their physical and probably also their biological properties. Varying velocities of the HA solution process seem to be correlated to different results in powder diffraction analysis (RDX) [1], a validated, routine procedure in mineralogy [2, 6] to analyse crystallized materials. As far we know there are no comparative RDX analyses for the TCP materials in clinical use. Goals: The dimension and quality of the crystallization of several bone regeneration materials are analysed by RDX. Material and methods: The materials analysed were divided in different groups: hydroxyapatite, tricalciumphosphate and bioglass. The materials are characterized by the specific intensity curve measurements. Results: The HA products, with the exception of Algipore, seem to be monophasic. Ceros80 and Endobone were the only ones which seem to be totally crystallized. The TCP products Biobase and Cerasorb are nearly monophasic, whereas Ceros82 seems to contain a mixture of 30% HA and 70% β-TCP. All TCPs show a high crystallization. The bioglasses did – as suspected – not show crystalline structures. Discussion: There are many possible causes for inhomogeneous crystallization of the investigated materials, as they are composites of different foreign ions, extremely small crystals or abnormal (deficient) apatites. How this affects the biological behaviour is not known. Summary: We found differences between the examined materials; how this affects the biological behaviour is unknown. Further investigations are neccesary to correlate the characteristics of the materials to the clinical outcome.
    Notes: Einleitung: Die kristalline Struktur von Knochenersatzmaterialien wie Hydroxylapatitkeramiken (HA) oder Trikalziumphosphatkeramiken (TCP) beeinflußt deren physikalische und sicher auch biologische Eigenschaften. Unterschiedliches Löslichkeitsverhalten von synthetischem und biologischem HA scheinen mit unterschiedlichen Ergebnissen in der Röntgenpulverdiffraktometrie (RDX), einem Routineverfahren der Materialwissenschaften [2, 6] zur Analyse kristalliner Strukturen, korreliert zu sein [1]. Vergleichende RDX-Analysen von TCP liegen in der einschlägigen Literatur nicht vor. Best et al. [4] unterstrichen in jüngster Zeit die Bedeutung der Charakterisierung der Knochenersatzmaterialien zum Verständnis der Resorptionsmechanismen [4]. Fragestellung: Ausmaß und Qualität der Kristallisation verschiedener z. Z. verfügbarer Knochenersatzmaterialien wurden mittels RDX-Analyse bestimmt. Material und Methoden: Die verwendeten Materialien wurden in 3 Gruppen eingeteilt: Hydroxylapatitkeramiken, Trikalziumphosphatkeramiken und Biogläser. Anhand der mittels Pulverdiffraktometer gewonnenen Intensitätsspektren können die Materialien hinsichtlich ihrer Zusammensetzung und Kristallisation charakterisiert werden. Ergebnisse: Die HA-Materialien (bis auf Algipore) scheinen monophasige Produkte zu sein, wobei nur Ceros80 und Endobone eine hohe Kristallisation aufweisen. Auch die TCP-Produkte Biobase und Cerasorb sind nahezu monophasig, während Ceros82 aus einer Mischung von 30% HA und 70% β-TCP zu bestehen scheint. Alle TCP weisen einen hohen Kristallisationsgrad auf. Die Biogläser zeigten erwartungsgemäß keine kristallinen Strukturen. Diskussion: Die möglichen Ursachen der inhomogenen Kristallisation der untersuchten Materialien reichen von der Zusammensetzung aus kleinen Einzelkristalliten über Fremdioneneinschlüsse zu defizitären Apatiten durch Kalziumkarbonatbeimengungen. Deren Bedeutung für das biologische Verhalten ist nicht geklärt. Resümee: Es fanden sich Unterschiede zwischen den untersuchten Materialien, deren Bedeutung für das biologische Verhalten nicht geklärt ist. Weiterführende Untersuchungen sind erforderlich, um diese Eigenschaften mit dem klinischen Verhalten zu korrelieren.
    Type of Medium: Electronic Resource
    Library Location Call Number Volume/Issue/Year Availability
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  • 3
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    Springer
    Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurgie 3 (1999), S. 140-145 
    ISSN: 1434-3940
    Keywords: Schlüsselwörter Konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie ; Dunkelfeldmikroskopie ; Bisbenzimidmarkierung ; Knochen ; Strahlenfolgen ; Radiogener Osteozytentod ; Key words Confocal laser scanning microscopy ; Microscopy ; Bisbenzimide labelling ; Bone ; Radiation effects ; Osteocytes ; Osteoradionecrosis
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Medicine
    Description / Table of Contents: Early radiation effects on human bone may lead to osteoradionecrosis (ORN). Direct bone cellular lesions [28] as well as fibrous degeneration of blood vessels [21] are considered to be pathologically relevant. Only few data on initial subclinical radiation effects are available. Patients were grouped according to the dose of radiation and clinical findings. Group 1: sound human bone of lower jaw, mostly collected during orthodontic surgery (n = 10 patients); group 2: specimens of lower jaw from patients with ORN (n = 12 patients); group 3: specimens of lower jaw from patients with head and neck cancer who were preoperatively treated with 36 Gy radiation; group 4: specimens of lower jaw from patients with head and neck cancer (n = 9) who were treated with 60–70 Gy radiation. Specimens were studied by confocal laser scanning microscopy (CLSM), by conventional light microscopy (DL) and by flourescence darkfield microscopy (DFM) after bisbenzimide staining (H 33258) of the viable cellular nuclei. For the correlating study of identical areas in CLSM and DL the specimens were prepared according to the sawing and grinding technique [8]. All the radiated bony specimens, regardless of the dose of radiation, showed areas of extensive or total loss of vitality of the osteocytes. This finding was also evident after 36 Gy and a short interval between radiation and sample collection (group 3). Additionally, in CLSM micromorphologic lesions of the lamellate structure were seen. With these results we can confirm the loss of vitality of the osteocytes as an initial radiation effect as described earlier [10, 23, 28]. In addition to these findings, alteration of the lamellate microstructure was found in the early phase after radiation. The functional and mechanical significance of these findings should be the subject of further studies.
    Notes: Für die infizierte Osteoradionekrose (IORN) des Kiefers werden unterschiedliche pathogenetische Mechanismen initialer Strahlenfolgen im Knochen diskutiert: Wichtige Parameter sind dabei die direkte Zellschädigung der Osteozyten [28] und die Gefäßfibrosierung [21]. Bislang liegen wenige Kenntnisse zum Ausmaß der initialen, subklinischen Veränderungen vor. 4 Probengruppen wurden anhand verschiedener Patientenkollektive definiert: Gruppe 1: gesunde Unterkieferproben meist von orthodontischen Operationen (n = 10 Patienten); Gruppe 2: Unterkieferproben mit manifester IORN (n = 12 Patienten); Grruppe 3: Unterkieferproben nach 36 Gy präoperativer Radio(chemo)therapie (n = 9 Patienten); Gruppe 4: Unterkieferproben nach 60–70 Gy Bestrahlung ohne Hinweise auf IORN (n = 9 Patienten). Alle Proben wurden histotomographisch mit konfokaler Laser-Scanning-Mikroskopie (CLSM), durchlichtmikroskopisch (DL) und dunkelfeldmikroskopisch (DFM) nach Fluoreszenzmarkierung des intakten Zellkerns (Bisbenzimid H 33258) untersucht. Korrelierende Histologien identischer Probenareale erfolgten an Trenndünnschliffen [8]. Als Ergebnisse wurden gefunden: 1. Alle unterschiedlich bestrahlte Knochenproben zeigten Areale mit weitgehendem bis vollständigem Verlust vitaler Osteozyten. Diese Strahlenfolge trat auch schon nach 36 Gy und kurzem Intervall bis zur Operation (Gruppe 3) auf. 2. Im CLSM zeigten sich zusätzlich mikromorphologische Veränderungen der lamellären Struktur, die zwischen den Probengruppen progredient waren. Hieraus können folgende Schlußfolgerungen gezogen werden: 1. Der vorbeschriebene Vitalitätsverlust der Osteozyten [10, 23, 28] konnte als sehr frühe, initiale, radiogene Läsion bestätigt werden. 2. Zusätzlich zeigten sich Veränderungen der lamellären Mikroarchitektur des Knochens als frühe und im Gruppenvergleich progrediente Strahlenläsion. Die mikromechanisch funktionelle Bedeutung dieser Veränderung muß in weiterführenden Untersuchungen eruiert werden.
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 4
    ISSN: 1434-3940
    Keywords: Schlüsselwörter ; Kalziumphosphatkeramiken ; Spezifische Oberfläche ; Knochenersatzmaterialien ; Poren ; Hydroxylapatit ; Key words ; Calciumphosphate ceramics ; Specific surface area ; Bone regeneration materials ; Pores ; Hydroxyapatite
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Medicine
    Description / Table of Contents: The surface area and the microporosity of bone regeneration materials influence their chemical and ¶biological properties. Therefore, the size of the specific surface area and the distribution of the pore diameters (pores 〈 1 μm) of bone regeneration materials were analyzed within this study. The analyzed hydroxyapatites were of synthetic, bovine, and phytotroph origin. The tricalcium phosphates and the bioglasses included only synthetic materials. The gas adsorption of each specimen was analyzed using a volumetric N2/Kr system (ASAP 2010, Micromeritics). Additionally, for materials with a specific surface area (〉 2 m2/g) the pore size distribution was evaluated by the BJH-method. Two of the ¶materials evaluated astonishingly large dimensions of the specific surface area (BioOss 79.7 m2/g, Algipore new 14.6 m2/g). A medium ¶surface area was found for Algipore old (4.9 m2/g) and Interpore200 ¶(2.64 m2/g). All other included materials showed only small sizes of the specific surface area (Ceros80 ¶1.8 m2/g, Ceros82 1.31 m2/g, Cerasorb 1.2 m2/g, Biobase 0.7 m2/g, Endobone 0.7 m2/g, Perioglas 0.6 m2/g, Allotropat50 0.23 m2/g, Biogran ¶0.2 m2/g). The materials with large and medium sizes of the specific surface area evaluated the following pore diameters: BioOss 2–50 nm, Algipore new 2–100 nm, Algipore old 5–50 nm, Interpore200 2–100 nm. Pore sizes less than 2 nm were not found in relevant numbers. The materials BioOss, old and new Algipore, and Interpore200 contain a large interconnecting mesopore system (diameter 〈 1 μm). For the materials Biobase, Endobone, Perioglas, Allotropat 50, and Biogran this cannot be assumed. The materials Ceros80, Ceros82, and Cerasorb evaluated a specific surface area between those and might include only a small part of these interconnecting pores. An influence of the interconnecting porosity and the different sizes of the specific surface areas on the biological behavior of the bone regeneration materials can be suggested.
    Notes: Fragestellung: Die Oberfläche sowie die Mikro- und Mesoporosität von Knochenersatzmaterialien beeinflussen deren chemische und biologische Eigenschaften. Daher wurden in dieser Untersuchung die Größe der spezifischen Oberfläche sowie die Verteilung der Porendurchmesser (Poren 〈 1 μm) in Knochenersatzmaterialien bestimmt. Material und Methode: Die untersuchten Hydroxylapatite waren synthetischen, bovinen und phytotrophen Ursprungs. Die Trikalziumphosphate und die Biogläser umfassten nur rein synthetische Materialien. ¶Die Gasadsorptionsuntersuchung je einer Probe erfolgte mit Hilfe eines volumetrischen N 2 -Kr-Systems (ASAP 2010, Micromeritics). Zusätzlich wurde für Materialien mit spezifischen Oberflächen ¶〉 2 m 2 /g die Porengrößenverteilung nach der BJH-Methode ermittelt. Ergebnisse: 1. Spezifische Oberfläche: 2 der Materialien zeigten eine auffallend große spezifische Oberfläche (BioOss 79,7 m 2 /g, Algipore neu 14,6 m 2 /g). Eine mittlere Oberfläche zeigten Algipore alt (4,9 m 2 /g) und Interpore 200 (2,64 m 2 /g). Die übrigen Materialien zeigten nur kleine Oberflächen (Ceros 80 1,8 m 2 /g, Ceros 82 ¶1,31 m 2 /g, Cerasorb 1,2 m 2 /g, Biobase 0,7 m 2 /g, Endobone 0,7 m 2 /g, Perioglas 0,6 m 2 /g, Allotropat 50 0,2 m 2 /g, Biogran 0,2 m 2 /g). 2. Häufigkeitsverteilung des Porendurchmessers: Die Materialien mit großen und mittleren spezifischen Oberflächen zeigten folgende Porendurchmesser: BioOss 2–50 nm, Algipore neu 2–¶100 nm, Algipore alt 5–50 nm, Interpore 200 2–100 nm. Porengrößen 〈 2 nm fanden sich kaum. Schlussfolgerungen: Die Materialien BioOss, Algipore alt und neu und Interpore 200 haben ein großes interkonnektierendes Mesoporensystem (Durchmesser 〈 1 μm). Für die Materialien Biobase, Endobone, Perioglas, Allotropat 50 und Biogran ist dies nicht anzunehmen. Die Materialien Ceros 80, Ceros 82 und Cerasorb zeigen eine dazwischen liegende spezifische Oberflächengröße und weisen einen mäßigen Anteil von solchen interkonnektierenden Poren auf. Ein Einfluss der interkonnektierenden Porosität und der deutlich unterschiedlichen spezifischen Oberflächen auf das Verhalten der Knochenersatzmaterialien in vivo ist nahe liegend.
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