ISSN:
1432-0428
Keywords:
Radioimmunoassay of gluoagon
;
glucagon secretion
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Medicine
Description / Table of Contents:
Resume Une méthode de dosage radioimmunologique du glucagon comportant une séparation de l'antigène marqué libre et de l'antigène marqué lié à l'anticorps par du charbon-dextran est décrite. Les réactions d'équilibre glucagon-131I ou-125I (0.060 ng) et anticorps (antisérum de lapin 1∶550, dilution finale 1∶6600) atteignent leur équilibre en 3 jours à 4 °C. L'emploi d'un inhibiteur des protéinases (Trasylol) empêche la dégradation de la fraction immunoreactive du glucagon pendant l'incubation. La sensibilité de la méthode (〈 à 0.020 ng) correspond à environ 0.100 ng/ml de plasma. La précision, la reproductibilité, la spécificité du dosage et quelques problèmes liés à la séparation par le charbon-dextran sont étudiés. La récupération du glucagon ajouté à du plasma est d'environ 90%. La concentration en glucagon dans le plasma veineux périphérique est en moyenne de 0.208 ng/ml chez l'homme normal à jeun, de 0.396 ng/ml chez le chien anesthésié à jeun, de 0.354 ng/ml chez le rat nourri et de 0.909 ng/ml chez le canard à jeun. La méthode de dosage proposée semble actuellement limitée à l'étude de la sécrétion du glucagon in vitro car l'antisérum que nous utilisons présente une réaction croisée avec une substance d'origine duodénale. L'importance de l'interférence de cette substance dans l'estimation des concentrations en glucagon du plasma reste cependant à déterminer.
Abstract:
Zusammenfassung Eine radioimmunologisohe Bestimmungsmethode für Glucagon unter Zuhilfenahme von Dextran-Holzkohle für die Trennung des freien und des antikörpergebundenen markierten Antigens wird beschrieben. Das Gleichgewicht zwischen mit 125I und 131I markiertem Glucagon (0.060 ng) und Antikörper (Kaninchen-Antiserum 1∶550 in einer Endverdünnung von 1∶6600) wird bei 4 °C in 3 Tagen erreicht. Der Zusatz eines Proteinasen-Hemmers (Trasylol) verhindert den Abbau der immunreaktiven Fraktion des Glucagons während der Inkubation. Die Empfindlichkeit der Methode erreicht etwa 0.100 ng/ml Plasma. Die Genauigkeit, die Reproduzierbarkeit, die Spezifität und einige Probleme, die bei der Trennung durch Dextran-Holzkohle auftauchen, werden untersucht. Die Wiederauffindungsquote für dem Plasma zugesetztes Gluoagon betrug ca. 90%. Die mittlere Glucagon-Konzentration im peripheren venösen Plasma bei fastenden Normalpersonen lag bei 0.208 ng/ml, beim fastenden anaesthesierten Hund bei 0.396 ng/ml, bei 0.354 ng/ml für die gefütterte Ratte und bei 0.909 ng/ml bei fastenden Enten. Die vorgeschlagene Bestimmungsmethode scheint nur für Untersuchungen über die in vitro Sektretion von Glucagon brauchbar zu sein, da das von uns verwandte Antiserum eine Kreuzreaktion mit einer aus dem Duodenum stammenden Substanz zeigt. Wie stark dieser Stoff die Messung von Glucagon-Konzentrationen im Plasma stört, bleibt noch festzustellen.
Notes:
Summary A dextran-coated charcoal radioimmunoassay of glucagon is described. Antigen (131 or 125I-glucagon, 0.060 ng) — antibody (rabbit antiserum 1∶550, final dilution 1∶6600) reactions reached equilibrium within 3 days at 4 °C. The use of a proteinase inhibitor (Trasylol) prevented incubation damage of the immunoreactive glucagon. The sensitivity of the assay (〈 to 0.020 ng) corresponds to about 0.100 ng/ml of plasma. The precision, the reproducibility, the specificity of the assay and some problems related to the dextran-charcoal separation have been studied. Recovery of glucagon added to plasma was approximatively 90%. The mean gluoagon concentration measured in peripheral venous plasma was 0.208 ng/ml in normal human subjects after an overnight fast, 0.396 ng/ml in anaesthetized dogs after an overnight fast, 0.354 ng/ml in fed rats and 0.909 ng/ml in the overnightfasted duck. Up to now, the use of the assay seems to be restricted to studies of glucagon secretion in vitro since our antiserum cross-reacts with a material extracted from the duodenum. The relative contribution of this material in the plasma glucagon determinations remains, however, to be established.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF00421439
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