ISSN:
1432-1831
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Medicine
Description / Table of Contents:
Summary The general problems connected with the diagnostic applications of immunofluorescence, with particular reference to identification of bacteria localized in tissue, are described. In experimenting with different conjugation procedures, empirical data were gathered which support the theory (Wood, Thompson, andGoldstein, 1965) that the major condition and site for combination of isocyanates with protein residues is the non-ionized epsilonamino radical of lysine. Additional corroboration was found for the view that the fluorescent antibody activity of an immune serum is not necessarily indicated by the titer of such common serologic tests as the precipitin reaction, and bacterial agglutination. It was also found possible and extremely simple to conjugate 7S-gamma globulin fractions directly, thus eliminating the additional steps that sometimes cause denaturation of the antibodies. Conjugates prepared from 7S-gamma globulin, fractionated with column chromatography, were found to be superior to labeled samples of whole serum, especially in their unusually high specificity and avidity. A solution to the main difficulty of making fluorescent antibody techniques available to the pathologist when no fresh frozen tissue is at hand, was explored and found to be reliable. Incubation of formalin or alcohol fixed tissue in phosphate buffered saline restored the water content and readjusted the pH sufficiently for positive immunofluorescence results to be obtained with each specimen that gave similar results with fresh frozen tissue.
Notes:
Zusammenfassung Die wesentlichen Probleme, welche bei der diagnostischen Anwendung der Imnrunofluorescenz und hier besonders beim Nachweis von den im Gewebe lokalisierten Bakterien auftreten, werden beschrieben. Bei der Prüfung verschiedener Konjugationsmethoden wurden empirisch eine Reihe von Befunden erhoben, welche die Theorie (Wood, Thompson u.Goldstein, 1965) stützen, daß als Bindungsstelle zwischen Isocyanaten und Aminosäuren im wesentlichen das nicht ionisierte Radikal des Lysins in Frage kommt. Weiterhin konnte die Ansicht bestätigt werden, daß der Gehalt eines Immunserums an fluorescierenden Antikörpern sich nicht notwendigerweise im Titer der üblichen serologischen Untersuchungsmethoden, wie z. B. dem Präcipitintest und der Bakterienagglutination, anzeigt. Außerdem stellte sich heraus, daß die Konjugation der 7S-Gamma-Globulin-Fraktion sich auch sehr leicht direkt durchführen ließ, wobei dann die sonst notwendigen Arbeitsgänge überflüssig wurden, die manchmal eine Denaturierung der Antikörper verursachen. Conjugate von durch Säulen-Chromatographie abgetrennten 7S-Gamma-Globulinen erwiesen sich als viel wirksamer als markierte Gesamtserumproben, besonders im Hinblick auf ihre ungewöhnlich hohe Spezifität und Avidität. Es wurde versucht, die Hauptschwierigkeiten zu beseitigen, die für den Pathologen bei der Verwendung der Immunofluorescenz entstehen, solange er kein tiefgefrorenes Gewebe zur Hand hat. Die angegebene Methode scheint ausreichend verläßlich. Die Inkubation von formalin- und alkoholfixierten Geweben in phosphatgepufferter Kochsalzlösung stellte den erforderlichen Wassergehalt und das für die Immunofluorescenz benötigte pH wieder her. Die mit den so behandelten Schnitten erzielten Resultate waren durchaus mit denen an frischem, tiefgefrorenem Material gefundenen vergleichbar.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF02195603
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