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Notes: Zusammenfassung Mit der radialen Immunodiffusionsmethode nachMancini wurden die IgG-, IgA-und IgM-Konzentrationen bei 55 Patienten mit verschiedenen Lebererkrankungen bestimmt. Die dabei erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 4 zusammengestellt. Das unterschiedliche Verhalten der Immunglobulinkonstellationen zwischen der akuten Hepatitis und der Lebercirrhose, vor allem der IgG-, IgA- und IgM-Konzentrationen ist signifikant. Bei der akuten Hepatitis nehmen die anfänglich stets erhöhten IgM innerhalb von 2–4 Wochen deutlich ab. Es besteht eine positive Korrelation zwischen der Stärke der Mesenchymproliferation und der IgA-und IgG-Konzentration sowie der Höhe der IgG/IgM-und IgA/IgM-Quotienten. Zwischen dem Ausmaß der Leberzellnekrosen und den Immunglobulinen sowie zwischen IgM-Konzentration und Thymolwert läßt sich keine Beziehung herstellen, ebensowenig zwischen dem Ig-Spiegel und der SGOT- und SGPT-Erhöhung. Die Veränderungen der Ig sind nicht leberoder krankheitsspezifisch. Die Untersuchung der Ig gibt jedoch im Rahmen des klinischen Gesamtbildes wertvolle Hinweise bei differentialdiagnostischen Überlegungen und für die Verlaufskontrolle zahlreicher akuter und chronischer Lebererkrankungen, besonders der Hepatitis und ihrer Folgezustände.

Notes: Summary A new method for the determination of creatine kinase-MB activity in the serum is presented. The principle of this method is the direct measurement of the activity of creatine kinase M subunits by inhibiting antibodies. The total test procedure takes 15 min. In the sera of all the 83 patients tested, who have clinically proven myocard infarction, creatine kinase-MB activity can be measured between the 6th and 28th hour after infarction. At the time of maximum total creatine kinase activity the percentage of creatine kinase-MB activity is between 6 and 17%, the mean value being 8%. In cases of emergency this method can be used for the differential diagnosis of elevated total creatine kinase activities of unknown origin.

Notes: Summary By differentiation of creatine kinase isoenzyme activities in sera using immunological methods the published data about occurrence of creatine kinase BB activities in patients with different diseases or after surgical treatment, respectively, cannot be verified in general. With a frequency in the order of magnitude of 1:1000 in the serum of old patients (age 57 to 85 years with one exception), however, creatine kinase BB activities can be measured. The range of activities is 15 to 234 U/l, or 19 to 94% of total creatine kinase activities, respectively. At the present time there is no possibility to correlate this phenomenon to any specific disease. These cases are detected by abnormally high results of CK-MB activity measurements with the immunoinhibition test (range 60 to 202% of total creatine kinase activities) which lead to a repeated analysis using immunoprecipitation. The results of all CK-BB patients investigated till now are presented and discussed.

Notes: Zusammenfassung Bei 5 homolog-nierentransplantierten und mit PAHLS behandelten sowie bei 2 nur mit PAHLS behandelten Hunden wurde die Antikörperbildungsfähigkeit gegen Hammelerythrocyten und gegen Pferdeserumproteine sowie das Verhalten der Immunglobuline während der Behandlung kontrolliert. Es konnte festgestellt werden, daß 1. die Antikörperbildung gegen Hammelerythrocyten (wenn diese nach Beginn der Behandlung gegeben wurden) oder gegen die zugeführten Pferdeserumproteine während der PAHLS-Behandlung abgeschwächt war 2. die Versuchstiere unter PAHLS-Behandlung schwächere anaphylaktische Reaktionen zeigten als mit Normalserum vom Pferd behandelte Hunde 3. die Immunoglobuline während der Behandlung nicht abfielen 4. die Versuchstiere keine Resistenzschwäche gegen bakterielle Infektionen bzw. keine Zeichen eines manifesten Antikörpermangelsyndroms zeigten.

Notes: Zusammenfassung Das Pferde-Antihundelymphocytenserum (PAHLS) wurde durch Immunisierung eines Pferdes mit Hundelymphocyten aus dem Ductus thoracicus gewonnen. Dieses Antiserum hat nicht nur eine Antikörperwirkung gegen Lymphocyten, sondern auch gegen Erythrocyten, Thrombocyten und Leukocyten, sowie andere Gewebsextrakte und Serumproteine des Hundes. Es wurden agglutinierende, cytotoxische und präcipitierende Antikörper festgestellt. Das mit Hundeserum voll absorbierte PAHLS enthält noch präcipitierende Antikörper gegen alle Organextrakte außer Milz. Der Lymphagglutinationstiter blieb nach der Absorption nahezu unverändert. Es war auch nicht möglich, alle gegen Serumproteine gerichteten Antikörper durch Absorption mit Organextrakten zu entfernen. Mit ausreichender Menge gewaschener Erythrocyten absorbiertes PAHLIS ist in vivo gut verträglich und zeigt im Ouchterlony-Doppel-diffusionstest keine präcipitierenden Antikörper mehr gegen Serumproteine und Organextrakte mit Ausnahme von Lymphocyten. Entsprechende Befunde konnten nur erhoben werden, wenn das PAHLS nicht nur mit Hundeserum, sondern auch mit allen Organextrakten, mit Ausnahme von Lymphocyten, zugleich absorbiert wurde. Nach den kombinatorischen Überlegungen über die durchgeführten Doppeldiffusionsteste und die verschiedenen Absorptionsversuche darf angenommen werden, daß im PAHLS mindestens ein „spezifischer“ präcipitierender Antikörper gegen Lymphocyten vorhanden ist.

Notes: Zusammenfassung Nach den Arbeiten vonSober u. Mitarb. hat sich die Methode der Säulenchromatographie unter Verwendung von DEAE-Cellulose und DEAE-Sephadex als ausgezeichnete präparative Methode für die Proteinchemie erwiesen. Unter Benützung eines modifizierten Verfahrens und bei Anwendung einer kontinuierlichen Gradientenelutionschromatographie wurden 65 Seren getrennt (25 Normalseren, 26 Fälle vonγG-Paraproteinämie, 7 Fälle vonγA-Proteinämie und 7 Fälle vonγM-Paraproteinämie). Bei einem Teil dieser Seren wurden mehrere Trennversuche unter geänderten Versuchsbedingungen und zum Teil unter Anwendung einer Doppelsäulentechnik vorgenommen. Bei den Normalseren ergab sich stets das gleiche Elutionschromatogramm, wobei die gewonnenen Proteinfraktionen entsprechend der üblichen Schwankungsbreite im Normalserum nur anteilmäßig varierten. Als erste Eiweißfraktion wird dasγG-Globulin als scharfer und gut abgegrenzter Peak eluiert. Die präparative Gewinnung ist daher gut möglich. Bei 26 Fällen vonγG-Paraproteinämie trat bei 20 Fällen das Paraprotein mit dem normalenγG-Globulin gemeinsam in diesem ersten Peak aus der Säule und war auch bei Änderung der Versuchsbedingungen nicht gegeneinander abzutrennen. Nur bei zwei dieser Fälle konnte eine einwandfreie Auftrennung zwischen normalemγG-Globulin undγG-Paraprotein erreicht werden, wenn anstelle von DEAE-Cellulose DEAE-Sephadex verwendet wurde. Bei zwei weiteren Fällen aus dieser Gruppe erschien das Paraprotein im Chromatogramm auch auf DEAE-Cellulose an einer anderen Stelle, an der im Normserum oder bei Dysproteinämien niemals ein Peak festgestellt worden war. Bei zwei weiteren Fällen vonγG-Paraproteinämie, bei denen die Besonderheit bestand, daß das Paraprotein bei der Elektrophorese die Beweglichkeit einesα 2-Globulins aufwies, trat das pathologische Protein an völlig atypischer Stelle im Eluat aus. Bei allen diesen Fällen konnte mit einer eingehenden immunologischen Analyse die Charakterisierung sowohl des normalen als auch der pathologischen Proteine erreicht werden. In der Gruppe derγA-Paraproteinämien ergab sich bei 10 von 11 Chromatogrammen bei 7 untersuchten Seren das gleiche typische Elutionsdiagramm mit Auftreten der pathologischen Eiweißfraktion im Postalbuminbereich. Nur in einem Fall wurde das Paraprotein zwischen dem Siderophilinpeak und dem Ende des Albuminbereiches nachgewiesen. In allen Fällen konnte das Paraprotein elektrophoretisch und immunologisch einheitlich gewonnen werden. Bei denγM-Paraproteinämien (Makroglobulinämien) ergab sich stets ein typisches Muster mit Nachweis des Paraproteins ganz am Ende des Elutionschromatogramms. Dort wurde ein intensiver Paraproteinpeak erfaßt, aus dem sich stets das einheitliche Makroglobulin gewinnen ließ. Damit konnte gezeigt werden, daß die Methode der kontinuierlichen Gradientenelutionschromatographie sehr oft allein schon zur Gewinnung von Paraproteinen führt, zumindest aber als entscheidender Schritt bei der präparativen Gewinnung von Paraproteinen im Rahmen mehrstufiger Verfahren eingesetzt werden kann. Über diese Möglichkeit hinaus ergibt sich aus den erhobenen Befunden, daß mit Hilfe der Gradientenelutionschromatographie eine weitergehende Charakterisierung von Paraproteinen möglich ist. Mit den bisherigen physiko-chemischen Methoden nicht mehr unterscheidbare Paraproteine aus verschiedenen immunologischen Gruppen von Paraproteinämien (γG-Paraproteinämien,γA-Paraproteinämien) unterschieden sich zum Teil durch ihr Verhalten bei der Gradientenelutionschromatographie dadurch, daß das Paraprotein an ungewöhnlicher Stelle austrat. Diese Befunde waren stets reproduzierbar. Berücksichtigt man, daß für den Zeitpunkt der Elution eines Proteins bei diesem Verfahren die Wechselbeziehungen zwischen Austauschermaterial, Charakteristik des Puffergradienten und Struktur des Proteins maßgebend ist und verändert bei vergleiehenden Untersuchungen (insbesondere mit der Doppelsäulentechnik) die beiden ersten Bedingungen nicht, so kann aus dem Auftreten eines Paraproteins an atypischer Stelle im Chromatogramm ein Rückschluß auf Strukturunterschiede getroffen werden. Damit stellt die kontinuierliche Gradientenelutionschromatographie im Rahmen der chemischen Untersuchung von Paraproteinen eine weitere Möglichkeit dar, worauf hingewiesen wird.

Notes: Summary In 962 paraproteinemias the class distribution revealed the following data: IgG paraproteinemia 627 cases (65%), IgA paraproteinemia 175 cases (18%), IgM paraproteinemia 118 cases (13%), double paraproteinemia 13 cases (1%), Bence Jones plasmacytoma 29 cases (3%). With single respect to the main classes IgG, IgA and IgM, the percentage changes to 68%, 19% and 13% respectively. By this the frequency distribution of the main paraproteinemia classes equals the relative serum concentration of the corresponding normal immunoglobulins of an age-adequate normal collective. The light chain type was determined in 717 paraproteins. The followingx/λ ratios were found: total of paraproteins 1.7:1, IgG paraproteins 1.7:1, IgA p. 1:1, IgM p. 4:1, micromolecular p. 1.7:1 and double p. 2.5:1. These ratios agree with the figures of normal immunoglobulines except for the IgM paraproteins. There is a significant difference between thex/λ ratio of IgM paraproteins and paraproteins of other classes. Following statistical analysis, the electrophoretical frequency distribution of our IgM and IgG paraproteins as well as of a pool of normal IgG and IgM immunogloublins are better represented by a fitted normal distribution curve of second mode (asymmetrical normal distribution curve). In comparison to this the IgA paraproteins and corresponding normal immunoglobulins are more similary distributed following a normal Gaussian distribution curve of first mode (symmetrical d. c.). Like normal immunoglobulins, the electrophoretical distribution of paraproteins extends from α2 to the slowγ range. The fitted electrophoretical frequency distribution of paraproteins reveals an obvious similarity with that of the corresponding normal immunoglobulins. By severe statistical analysis, however, there was a significant difference between the non-fitted distribution curves of IgG and IgA paraproteins and the normal IgG and IgA immunoglobulins, respectively, in contrast to the distribution curves of IgM paraproteins and IgM normal immunoglobulins. No correlation was found between the light chain type of paraprotein and its electrophoretical mobility or sedimentation characteristics. By our actual knowledge about normal immunoglobulins and paraproteins the assumption is allowed that paraproteins are not structurally abnormal neither functionally inert but excessively increased, physicochemically and immunologically homogeneous immunoglobulins.

Notes: Summary We investigated the activity kinetics of CK-total and CK-MB in 83 patients with proven myocardial infarctions. Serial serum samples were taken at intervals of 2–6 h. The activity of isoenzym CK-MB was determined by means of the immunological inhibition method. CK-MB activity was determined in all patients. The mean peak activity of CK-MB was 65 U/l (range: 9-241 U/l). At the time of peak CK-MB activity the mean percentage CK-MB activity was 13.2% (range: 3.4–21.7%). The CK-MB activity reached its peak at 17.4 h (range: 3.0–32.5 h) after the onset of retrosternal pain. This is 1.4 h after peak CK-total activity. The mean disappearance rate constant for CK-MB (n=31) was found to be 9.3×10−4 U/min with a large individual variation. This value corresponds to a half life of 12.5 h (CK-total: 15.5 h). The determination of CK-MB activity is therefore only of diagnostic significance within 48 h of possible myocardial occurrence. Moreover, isoenzyme CK-MB is not found exclusively in myocardium. For this reason it is better to use the percentage CK-MB activity in the differential diagnosis of myocardial infarction. With 80% of the patients this value is greater than 6% within 36 h of proven myocardial infarction.