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    Isolation of rapidly labelled nuclear RNA of high specific activity from human leukaemic cells (1973)
    Springer
    Journal of molecular medicine 51 (1973), S. 677-679 
    Details
    ISSN: 1432-1440
    Keywords: Human Leukaemia ; 32P-orthophosphate ; nuclear RNA ; Menschliche Leukämie ; 32P-Orthophosphat ; nucleare RNA
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung Es werden Methoden zur Präparation von nuklearer RNA hoher spezifischer Aktivität aus menschlichen Leukämiezellen beschrieben. Das Inkubationsmedium basiert auf Hepes-Puffer und der Verwendung von dialysiertem Kalbsserum zur Verbesserung der Bedingungen für den32P-Orthophosphat-Einbau in die hochmolekulare Kern-RNA. Die erreichten spezifischen Aktivitäten erlauben detaillierte Nucleotid- und Oligonucleotidanalysen der verschiedenartigen Ribonucleinsäurespezies in menschlichen Leukämiezellen.
    Notes: Summary Methods are presented which provide the preparation of highly labelled nuclear RNA from cells of the different forms of human leukaemia. An incubation medium is described that is based on Hepes buffer and on the use of exhaustively dialyzed fetal calf serum offering suitable conditions for the uptake of32P-orthophosphate into the RNA of leukaemic nuclei. The specific activities reached may allow more detailed nucleotide and oligonucleotide analyses of the various RNA species present in human leukaemic cells.
    Type of Medium: Electronic Resource
    URL: http://dx.doi.org/10.1007/BF01468172
    Library Location Call Number Volume/Issue/Year Availability
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    Paper (German National Licenses)
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  • 2
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    Differences in nuclear RNA labelling patterns of BURKITT lymphoma, leukaemic lymphosarcoma and various human leukaemias (1973)
    Springer
    Journal of molecular medicine 51 (1973), S. 680-684 
    Details
    ISSN: 1432-1440
    Keywords: BURKITT lymphoma ; leukaemic lymphosarcoma ; chronic myelotic leukaemia (CML) ; acute myeloblastic leukaemia (AML) ; chronic lymphocytic leukaemia (CLL) ; 32P-orthophosphate ; nuclear RNA ; Burkitt-Lymphom ; leukämische Lymphosarcomatose ; akute myeloische Leukämie (AML) ; chronischmyeloische Leukämie (CML) ; chronisch-lymphatische Leukämie (CLL) ; 32P-Orthophosphat ; nucleare RNA
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung Aus Zellen des Burkitt-Lymphoms, eukämischer Lymphosarcomatose, chronisch-lymphatischer Leukämie, chronisch-myeloischer und akuter myeloischer Leukämie wurden nach sechsstündiger32P-Markierung in einem phosphatarmen Medium Zellkerne mit Hilfe des Zitronensäure-Verfahrens isoliert und die nucleare RNA mit der heißen Phenol-SDS-Methode extrahiert. Nach Fraktionierung der kernspezifischen Nucleinsäuren über Zucker-Dichtegradienten fanden sich markante Unterschiede in der32P-Radioaktivitätsverteilung. Insbesondere war eine differente Markierung der nuclearen 45S RNA, welche als Vorläufer ribosomaler 28S und 18S RNA gilt, festzustellen. Die niedrigsten spezifischen Aktivitäten des ribosomalen Vorläufers fanden sich bei der CML, die höchsten bei AML, leukämischem Lymphosarkom und Burkitt-Tumor. Bemerkenswert erscheint die aktive Synthese präribosomaler (45S/35S) RNA in Zellen der CLL, deren DNA-Syntheserate äußerst niedrig ist. Zur Klärung der Frage, ob die im Nucleolus der unreifen Zellen gebildeten hochmolekularen Nucleinsäuren quantitative oder qualitative Unterschiede zwischen myeloischen und lymphatischen Zellen aufweisen, sind strukturchemische Untersuchungen im Gange.
    Notes: Summary Nuclear RNA was isolated from citric acid nuclei derived from AML, CML, CLL, leukaemic lymphosarcoma and BURKITT lymphoma cells after 6 hours incubation with32P-orthophosphate in a phosphate-free medium. In fractionations on sucrose density gradients, marked differences were found in the distribution of the32P-radioactivity mainly in the 45S fraction containing the ribosomal precursor RNA. The lowest specific activities of nuclear 45S RNA were found in CML; very high labelling accurred in cells of AML, leukaemic lymphosarcoma and BURKITT lymphoma. In CLL cells which are known for lack in DNA synthesis, pre-ribosomal 45S and 35S RNA were labelled to a remarkable extent. Studies are in progress in order to define possible differences in nuclear RNA structures between lymphocytic and granulocytic cell lines.
    Type of Medium: Electronic Resource
    URL: http://dx.doi.org/10.1007/BF01468173
    Library Location Call Number Volume/Issue/Year Availability
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    Paper (German National Licenses)
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  • 3
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    Makromolekulare Besonderheiten des Lymphocyten der chronisch-lymphatischen Leukämie (CLL) (1974)
    Springer
    Journal of molecular medicine 52 (1974), S. 1093-1102 
    Details
    ISSN: 1432-1440
    Keywords: Chronic lymphocytic leukemia ; DNA synthesis ; RNA synthesis and structures ; nuclear proteins ; Chronisch-lymphatische Leukämie ; DNA-Synthese ; RNA-Synthese und-Strukturen ; nucleare Proteine
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung Die jüngsten molekularbiologischen Untersuchungen an Lymphocyten der chronisch-lymphatischen Leukämie bestätigen den neoplastischen Charakter dieser Zellen. Funktionelle und strukturelle, z.T. qualitative Unterschiede in der Biochemie von DNA, RNA und Proteinen belegen die biologischen Sonderstellung dieser Erkrankung, bei deren Pathogenese Oncornaviren nach den bisher gesicherten Befunden wahrscheinlich keine Bedeutung haben. Zellen der chronisch-lymphatischen Leukämie sind durch verschiedenste makromolekulare Abnormalitäten ausgezeichnet: multiple DNA-Polymerasen nach PHA-Stimulation, vermindertes Aktinomycin-Bindungsvermögen, veränderte Transcription des Chromatins, erhöhten DNA-repair, erhöhte RNA-Synthese, vermehrte Synthese ribosomaler Vorstufen bei mangelhafter Ribosomenreifung, veränderte32P-Nucleotidkomposition und veränderte Oligonucleotidfrequenzen in nuclearer 45S RNA und ribosomaler 28S RNA, mangelhafte Stimulierung des nucleolaren „processing“ durch PHA, verminderten Lysosomen- und Polysomengehalt, Funktionseinbuße der Ribosomen in zellfreien Systemen, neue Polyribonucleotidsequenzen in der nuclearen heterogenen RNA sowie durch qualitative und quantitative Veränderungen des Kernproteinmusters nach zweidimensionaler Gel-Elektrophorese. Die Interpretation des CLL-Lymphocyten als Bähnliche Zelle erscheint im Zusammenhang mit diesen neuen biochemischen Daten als nicht ausreichend.
    Notes: Summary Recent studies on the molecular biology of the lymphocyte of chronic lymphocytic leukemia confirm the neoplastic nature of these cells. Functional and structural differences in the biochemistry of DNA, RNA and proteins define the biological peculiarity of this disease in which oncorna viruses are probably of no pathogenetic importance. Cells of chronic lymphocytic leukemia are characterized by various macromolecular abnormalities: multiple DNA-polymerases after PHA-stimulation, decreased actinomycin binding capacity, altered transcription of the chromatin, elevated DNA-repair, increased RNA-synthesis, increased synthesis of ribosomal precursors combined with a failure in ribosomal maturation, different32P nucleotide composition and oligonucleotide frequencies of nuclear 45S RNA and ribosomal 28S RNA, impairment in stimulation of nucleolar “processing” by PHA, decreased lysosome and polysome content, functional impairment of ribosomes in cell-free systems, new hybridizable polyribonucleotide sequences in nuclear heterogeneous RNA as well as qualitative and quantitative differences in the nuclear proteins after two-dimensional mapping by gel electrophoresis. The interpretation of the CLL-lymphocyte as a B-like cell does not seem to be sufficient with respect to the new biochemical data.
    Type of Medium: Electronic Resource
    URL: http://dx.doi.org/10.1007/BF01468619
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    Paper (German National Licenses)
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  • 4
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    Defective rRNA synthesis in human leukaemic blast cells? (1974)
    [s.l.] : Nature Publishing Group
    Nature 248 (1974), S. 673-675 
    Details
    ISSN: 1476-4687
    Source: Nature Archives 1869 - 2009
    Topics: Biology , Chemistry and Pharmacology , Medicine , Natural Sciences in General , Physics
    Notes: [Auszug] Studies in this laboratory have yielded highly specific ;j2P-labelling of nuclear and ribosomal high molecular weight RNA using a HEPES-buffered, phosphate-free medium5. FIG. 1 a, Sucrose density gradient centrifugation of nuclear RNA from acute myeloblastic leukaemia cells. The cells were ...
    Type of Medium: Electronic Resource
    URL: http://dx.doi.org/10.1038/248673a0
    Library Location Call Number Volume/Issue/Year Availability
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    Paper (German National Licenses)
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  • 5
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    Fehlerhafte synthese ribosomaler Nucleinsäuren in menschlichen Leukämiezellen (1974)
    Springer
    Journal of cancer research and clinical oncology 82 (1974), S. 159-173 
    Details
    ISSN: 1432-1335
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung Zellen verschiedener menschlicher Leukämien wurden isoliert und ihre ribosomale RNS präpariert. Nach einer in vitro-Markierung über 9 Std mit 32P-Orthophosphat wurde die 28 S RNA durch Nucleotidanalyse und Oligonekleotidfrequenz-Untersuchungen an Di- und Trinucleotiden charakterisiert, die bei vollständiger Verdauung mit PankreasRNase freigesetzt wurden. Es ergab sich: 1. 28 S RNA aus Zellen der chronisch-lymphatischen Leukämic und des leukämischen Lymphosarkoms zeigte niedrigere Anteile der Partialsequenzen G-Cp und G-G-Cp und höhere Frequenzen für A-Up und A-A-Up, wenn man sie mit Zellen der AML und PHA-stimulierten Lymphocyten verglich. 2. Feine strukturelle Unterschiede innerhalb der Gruppe der akuten myeloblastischen Leukosen wiesen auf Mikroheterogenität ribosomaler Nucleinsäuren in diesen Zellen. 3. Im Unterschied zu PHA-stimulierten Normallymphocyten fand sich bei allen leukämischen Zellen ein erhöhter Isotopengehalt in neusynthetisierter niedermolekularer RNA des 5S-Bereiches. 4. Das auffallendste Merkmal leukämischer Blasten, beim Vergleich mit PHA-stimulierten Lymphocyten, war eine Diskrepanz zwischen hochspezifischer Markierung der nuclearen präribosomalen 45 S RNA und extrem niedrigem 32P-Gehalt in den cytoplasmatischen rRNA-Fraktionen. Offensichtlich ist in leukämischen Elasten die Synthese ribosomaler 28 S RNA aus ihrem Vorläufer im Nucleolus (45 S RNA) partiell blockiert.
    Notes: Abstract Leukemia cells were isolated and ribosomal RNA was prepared from various human leukemia cells. After in vitro labeling of the cells for 9 h with 32P-orthophosphate, the 28 S rRNA was characterized by nucleotide analysis and by oligonucleotide frequency studies on dinucleotides and trinucleotides released by complete digestion with pancreatic RNase. The following results were obtained: 1. In 28 S rRNA of chronic lymphocytic leukemia and leukemic lymphosarcoma lower frequencies were determined for the partial sequences G-Cp and G-G-Cp and higher values were found for A-Up and A-A-Up when compared with PHA-stimulated, normal lymphocytes. 2. Minor structural differences within the group of acute leukemias suggested some heterogeneity in ribosomal RNA of these cells. 3. Most of the leukemic cells studied showed a higher isotope content in newly synthesized low molecular weight RNA when compared to normal lymphocytes. 4. The specific activity of label found in 28 S RNA of AML cells was significantly lower compared to PHA-stimulated lymphocytes suggesting a block in the processing of preribosomal RNA in the leukemia cells.
    Type of Medium: Electronic Resource
    URL: http://dx.doi.org/10.1007/BF00284501
    Library Location Call Number Volume/Issue/Year Availability
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    Paper (German National Licenses)
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  • 6
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    Differences in the primary structure of nucleolar and ribosomal high molecular weight RNA of the Novikoff hepatoma and rat liver, and possible therapeutic implications (1972)
    Springer
    Journal of cancer research and clinical oncology 78 (1972), S. 265-281 
    Details
    ISSN: 1432-1335
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Medicine
    Description / Table of Contents: Zusammenfassung Bemerkenswerte Portschritte in den Methoden zur Isolierung von Kernen und Kernkörperchen aus Tumorzellen haben zusammen mit der raschen Entwicklung von Techniken zur Reinigung und strukturellen Analyse hochmolekularer RNA neue Möglichkeiten zum Vergleich zwischen Tumorzellen und anderen Zellen geschaffen. Bei hochgereinigter nucleolarer 45S, 35S und 28S RNA sowie ribosomaler 28S und 18S RNA aus Novikoff-Hepatomzellen wurde nach In-vitro-Markierung mit 32P-Orthophosphat eine vollständige Hydrolyse mit pankreatischer RNase durchgeführt. 28S RNA in-vivo-markierter Rattenleber wurde denselben Bedingungen unterworfen. Die resultierenden Oligonucleotide sind purinhaltige Produkte mit einem Pyrimidinrest am 3-terminalen Ende; in der Summe werden die gesamten Oligonucleotide eines Hydrolysats als der Pyrimidin-Katalog des betreffenden ENA-Moleküls bezeichnet. Sie wurden zunächst entsprechend ihrer Kettenlänge bei pH 7,6 über DEAE-Sephadex A-25 getrennt und die Einzelkomponenten wurden entweder durch Papierelektrophorese bei pH 3,5 (Mono- und Dinucleotide) oder durch einen zweiten säulenchromatographischen Schritt über DEAE-Sephadex A-25 bei pH 3,3 isoliert. (Heptabis Tridecanucleotide). Mit Hilfe von Nucleotidanalyse, kompletter Verdauung mit T1-RNase und partieller Hydrolyse mit Milzphosphodiesterase wurden Sequenzanalysen durchgeführt. Die Primärsequenzen sowie die Häufigkeit solcher Oligonucletide wurden verglichen zwischen den verschiedenen hochmolekularen nucleolaren und ribosomalen RNA-Species des Novikoff-Hepatoms und der 28S RNA aus Ribosomen der Rattenleber. Interessanterweise unterschieden sich die polypurinen Sequenzbereiche der ribosomalen 18S RNA von denen der höhermolekularen Ribonucleinsäuren des Nucleolus, während zwischen ribosomaler und nucleolarer 28S RNA bezüglich der längeren Substrukturen keine Unterschiede nachweisbar waren. Auch bei der 28S RNA aus Leber-Ribosomen waren die isolierten längeren Polypurine identisch. Andererseits fanden sich signifikante Unterschiede beim Vergleich der Frequenzen pro Molekül für die Dinucleotide, wobei im Novikoff-Hepatom 134-G-Up-Reste, in der Rattenleber 103 solcher Partialsequenzen für die ribosomale 28S RNA bestimmt werden konnten. Diesen Kalkulationen ist eine Kettenlänge von 4500 Nucleotiden pro Molekül 28S RNA zugrundegelegt. Die jetzigen Ergebnisse ergänzen die bisher gefundenen Hinweise auf definierte Unterschiede in den Primärsequenzen hochmolekularer RNA-Species zwischen Tumor- und Normalzellen. Es wird versucht, unter Zuhilfenahme der bisherigen Kenntnisse diese evtl. spezifischen Sequenzbereiche näher zu lokalisieren. Mögliche therapeutische Konsequenzen und die kritischen wegweisenden Untersuchungen hierzu werden diskutiert.
    Notes: Summary The remarkable advances in the methods for the isolation of nuclei and nucleoli of cancer cells along with the rapid evolution of techniques for purification and structural analyses of high molecular weight RNA has provided new opportunities to comparatively evaluate the constituents of tumor cells and other cells. Complete pancreatic RNase digestion was carried out on highly purified nucleolar 45S, 35S and 28S RNA and ribosomal 28S and 18S RNA of Novikoff hepatoma ascites cells which were highly labeled in vitro with 32P-orthophosphate. In addition, rat liver ribosomal 28S RNA was labeled in vivo and subjected to the same isolation and RNase digestion procedure. The resultant oligonucleotides of the digests are purine containing products with a pyrimidine 3′ terminal, altogether referred to as the pyrimidine catalog of the RNA molecule. They were separated on DEAE Sephadex A-25 at pH 7.6 according to chain length and the single components were isolated by paper electrophoresis at pH 3.5 (mono- and dinucleotides) or by rechromatography on DEAE Sephadex A-25 at pH 3.3 (hepta- to tridecanucleotides). Sequence studies were carried out by means of nucleotide analysis, complete digestion with T1 RNase and partial digestion with spleen phosphodiesterase. The oligonucleotide sequences and their frequencies were compared between the different high molecular weight RNA species of the Novikoff hepatoma and 28S ribosomal RNA of rat liver. Interestingly, marked differences were found between the substructures of nucleolar 45S, 35S and 28S RNA compared to those of ribosomal 18S RNA. The longest polypurine sequences of 28S ribosomal RNA were identical to those of 28S nucleolar RNA and no differences were found between polypurines of the Novikoff hepatoma and rat liver. However, when the frequencies were determined for the mono- and dinucleotides, significant differences appeared mainly for the dinucleotide G-Up. On the basis of a calculated chain length of 4.500 for ribosomal 28S RNA, 134 G-Up residues were calculated for the Novikoff hepatoma compared to 103 for 28S rRNA of rat liver. These results provide further evidence for defined sequence differences between high molecular weight RNA of tumor cells and other cells and possibly point the way to definitive cancer chemotherapy. Critical evaluations of potential strategies are discussed.
    Type of Medium: Electronic Resource
    URL: http://dx.doi.org/10.1007/BF00284754
    Library Location Call Number Volume/Issue/Year Availability
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