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Notizen: Zusammenfassung Bei 478 Paraproteinämieseren wurde in 31 Fällen =6,5% in der Immunoelektrophorese ein „Depotfleck“ festgestellt. Bei 12 Fällen war zusätzlich keine für einen bestimmten Paraproteinämietyp charakteristische Präcipitationslinie nachweisbar (Gruppe I). Die übrigen Fälle zeigten zusätzlich eine typische γM-Paramakroglobulinlinie (Gruppe II). 10 Fälle der Gruppe I waren als Makroglobulinämie Waldenstroem und zwei als Plamocytom gesichert. Die Inkubation mit Cystein und anschließende Papier-, Acetat- und Immunoelektrophoreseuntersuchung erwies sich für die Differenzierung aller jener Fälle, die in der Elektrophorese einen Paraproteingradienten und in der Immunoelektrophorese einen Depotfleck ohne zusätzliche für einen Paraproteintyp charakteristische Präcipitationslinie aufwiesen, als ein sehr einfaches und brauchbares Verfahren. Bei Vorliegen einer Makroglobulinämie kam es bei unseren Untersuchungen zu völligem Verschwinden bzw. zu starker Abschwächung des Depotfleckes und Auftreten neuer für eine Makroglobulinämie typischer Präcipitationslinien in der Immunoelektrophorese. In der Trägerelektrophorese kam es zu einer Verbreiterung bzw. Verdoppelung des Paraproteingradienten. Bei 2 Plasmocytomfällen war nach Cysteinzusatz jedoch keine Änderung festzustellen.

Notizen: Zusammenfassung Bei 5 homolog-nierentransplantierten und mit PAHLS behandelten sowie bei 2 nur mit PAHLS behandelten Hunden wurde die Antikörperbildungsfähigkeit gegen Hammelerythrocyten und gegen Pferdeserumproteine sowie das Verhalten der Immunglobuline während der Behandlung kontrolliert. Es konnte festgestellt werden, daß 1. die Antikörperbildung gegen Hammelerythrocyten (wenn diese nach Beginn der Behandlung gegeben wurden) oder gegen die zugeführten Pferdeserumproteine während der PAHLS-Behandlung abgeschwächt war 2. die Versuchstiere unter PAHLS-Behandlung schwächere anaphylaktische Reaktionen zeigten als mit Normalserum vom Pferd behandelte Hunde 3. die Immunoglobuline während der Behandlung nicht abfielen 4. die Versuchstiere keine Resistenzschwäche gegen bakterielle Infektionen bzw. keine Zeichen eines manifesten Antikörpermangelsyndroms zeigten.

Notizen: Zusammenfassung Das Pferde-Antihundelymphocytenserum (PAHLS) wurde durch Immunisierung eines Pferdes mit Hundelymphocyten aus dem Ductus thoracicus gewonnen. Dieses Antiserum hat nicht nur eine Antikörperwirkung gegen Lymphocyten, sondern auch gegen Erythrocyten, Thrombocyten und Leukocyten, sowie andere Gewebsextrakte und Serumproteine des Hundes. Es wurden agglutinierende, cytotoxische und präcipitierende Antikörper festgestellt. Das mit Hundeserum voll absorbierte PAHLS enthält noch präcipitierende Antikörper gegen alle Organextrakte außer Milz. Der Lymphagglutinationstiter blieb nach der Absorption nahezu unverändert. Es war auch nicht möglich, alle gegen Serumproteine gerichteten Antikörper durch Absorption mit Organextrakten zu entfernen. Mit ausreichender Menge gewaschener Erythrocyten absorbiertes PAHLIS ist in vivo gut verträglich und zeigt im Ouchterlony-Doppel-diffusionstest keine präcipitierenden Antikörper mehr gegen Serumproteine und Organextrakte mit Ausnahme von Lymphocyten. Entsprechende Befunde konnten nur erhoben werden, wenn das PAHLS nicht nur mit Hundeserum, sondern auch mit allen Organextrakten, mit Ausnahme von Lymphocyten, zugleich absorbiert wurde. Nach den kombinatorischen Überlegungen über die durchgeführten Doppeldiffusionsteste und die verschiedenen Absorptionsversuche darf angenommen werden, daß im PAHLS mindestens ein „spezifischer“ präcipitierender Antikörper gegen Lymphocyten vorhanden ist.

Notizen: Zusammenfassung Nach den Arbeiten vonSober u. Mitarb. hat sich die Methode der Säulenchromatographie unter Verwendung von DEAE-Cellulose und DEAE-Sephadex als ausgezeichnete präparative Methode für die Proteinchemie erwiesen. Unter Benützung eines modifizierten Verfahrens und bei Anwendung einer kontinuierlichen Gradientenelutionschromatographie wurden 65 Seren getrennt (25 Normalseren, 26 Fälle vonγG-Paraproteinämie, 7 Fälle vonγA-Proteinämie und 7 Fälle vonγM-Paraproteinämie). Bei einem Teil dieser Seren wurden mehrere Trennversuche unter geänderten Versuchsbedingungen und zum Teil unter Anwendung einer Doppelsäulentechnik vorgenommen. Bei den Normalseren ergab sich stets das gleiche Elutionschromatogramm, wobei die gewonnenen Proteinfraktionen entsprechend der üblichen Schwankungsbreite im Normalserum nur anteilmäßig varierten. Als erste Eiweißfraktion wird dasγG-Globulin als scharfer und gut abgegrenzter Peak eluiert. Die präparative Gewinnung ist daher gut möglich. Bei 26 Fällen vonγG-Paraproteinämie trat bei 20 Fällen das Paraprotein mit dem normalenγG-Globulin gemeinsam in diesem ersten Peak aus der Säule und war auch bei Änderung der Versuchsbedingungen nicht gegeneinander abzutrennen. Nur bei zwei dieser Fälle konnte eine einwandfreie Auftrennung zwischen normalemγG-Globulin undγG-Paraprotein erreicht werden, wenn anstelle von DEAE-Cellulose DEAE-Sephadex verwendet wurde. Bei zwei weiteren Fällen aus dieser Gruppe erschien das Paraprotein im Chromatogramm auch auf DEAE-Cellulose an einer anderen Stelle, an der im Normserum oder bei Dysproteinämien niemals ein Peak festgestellt worden war. Bei zwei weiteren Fällen vonγG-Paraproteinämie, bei denen die Besonderheit bestand, daß das Paraprotein bei der Elektrophorese die Beweglichkeit einesα 2-Globulins aufwies, trat das pathologische Protein an völlig atypischer Stelle im Eluat aus. Bei allen diesen Fällen konnte mit einer eingehenden immunologischen Analyse die Charakterisierung sowohl des normalen als auch der pathologischen Proteine erreicht werden. In der Gruppe derγA-Paraproteinämien ergab sich bei 10 von 11 Chromatogrammen bei 7 untersuchten Seren das gleiche typische Elutionsdiagramm mit Auftreten der pathologischen Eiweißfraktion im Postalbuminbereich. Nur in einem Fall wurde das Paraprotein zwischen dem Siderophilinpeak und dem Ende des Albuminbereiches nachgewiesen. In allen Fällen konnte das Paraprotein elektrophoretisch und immunologisch einheitlich gewonnen werden. Bei denγM-Paraproteinämien (Makroglobulinämien) ergab sich stets ein typisches Muster mit Nachweis des Paraproteins ganz am Ende des Elutionschromatogramms. Dort wurde ein intensiver Paraproteinpeak erfaßt, aus dem sich stets das einheitliche Makroglobulin gewinnen ließ. Damit konnte gezeigt werden, daß die Methode der kontinuierlichen Gradientenelutionschromatographie sehr oft allein schon zur Gewinnung von Paraproteinen führt, zumindest aber als entscheidender Schritt bei der präparativen Gewinnung von Paraproteinen im Rahmen mehrstufiger Verfahren eingesetzt werden kann. Über diese Möglichkeit hinaus ergibt sich aus den erhobenen Befunden, daß mit Hilfe der Gradientenelutionschromatographie eine weitergehende Charakterisierung von Paraproteinen möglich ist. Mit den bisherigen physiko-chemischen Methoden nicht mehr unterscheidbare Paraproteine aus verschiedenen immunologischen Gruppen von Paraproteinämien (γG-Paraproteinämien,γA-Paraproteinämien) unterschieden sich zum Teil durch ihr Verhalten bei der Gradientenelutionschromatographie dadurch, daß das Paraprotein an ungewöhnlicher Stelle austrat. Diese Befunde waren stets reproduzierbar. Berücksichtigt man, daß für den Zeitpunkt der Elution eines Proteins bei diesem Verfahren die Wechselbeziehungen zwischen Austauschermaterial, Charakteristik des Puffergradienten und Struktur des Proteins maßgebend ist und verändert bei vergleiehenden Untersuchungen (insbesondere mit der Doppelsäulentechnik) die beiden ersten Bedingungen nicht, so kann aus dem Auftreten eines Paraproteins an atypischer Stelle im Chromatogramm ein Rückschluß auf Strukturunterschiede getroffen werden. Damit stellt die kontinuierliche Gradientenelutionschromatographie im Rahmen der chemischen Untersuchung von Paraproteinen eine weitere Möglichkeit dar, worauf hingewiesen wird.

Notizen: Zusammenfassung Klinik und Verlauf eines IgG-Plasmocytoms mit ossärer und tumorartiger extraossärer Ausbreitung bei einer 64jährigen Patientin werden beschrieben. Pleurabefall mit Exsudatbildung des Plasmocytoms bestimmten Verlauf und therapeutische Bemühungen wesentlich. Immunelektrophoretische Befunde sowie lichtmikroskopische Besonderheiten dieses Plasmocytoms in Sternalpunktat, Pleuraexsudat, Myelotomiepräparat und autoptisch gewonnenen Geweben werden dargestellt. Von besonderem Interesse sind die feinstrukturellen Befunde an den Plasmocytomzellen aus Sternalmark, peripherem Blut und postmortal gewonnenem Gewebe, vor allem die reichliche Ausbildung fibrillärer Strukturen in Nachbarschaft der gelappten und segmentierten Kerne. Die Problematik der genauen Einordnung derartiger Krankheitsbilder und der Rolle des Elektronenmikroskops hierbei werden diskutiert.

Notizen: Zusammenfassung Es werden experimentelle Untersuchungen zur Steigerung der Spezifität und Verbesserung der Verträglichkeit von heterologen Antilymphocytenseren (ALS) geschildert. 1. In Analogie zur Verhütung der Rhesussensibilisierung durch Antikörper konnte die Entstehung unerwünschter Hämagglutinine bei der Herstellung von ALS durch passive Zufuhr entsprechender Antikörper gegen Erythrocyten gehemmt werden. Dieses Modellsystem läßt sich vermutlich auch auf die Unterdrückung anderer unerwünschter Antikörper übertragen. 2. Ein Zustand der immunologischen Toleranz gegenüber IgG vom Pferd konnte in erwachsenen Hunden durch wiederholte Injektionen von ultrazentrifugiertem IgG erzeugt werden. Dieses Vorgehen könnte einen Weg darstellen, Überempfindlichkeitsreaktionen bei längerer Anwendung von ALS bzw. von Gammaglobulinfraktionen zu vermeiden.

Notizen: Zusammenfassung Es wird über das Auftreten von Doppelalbuminämie in einer Sippe berichtet. Von 54 noch lebenden blutsverwandten Mitgliedern wurden 31 untersucht. Davon wiesen 17 (10 weibliche, 7 männliche) den Befund einer erbbedingten Doppelalbuminämie auf. Der Doppelalbuminämiebefund konnte mittels Acetatfolienelektrophorese-Untersuchung der Seren erhoben und als zum langsamen Typ gehörig gesichert werden. Die Papierelektrophorese-Untersuchung erbrachte keine eindeutige Trennung der beiden Albuminkomponenten, die in der CAF-Elektrophorese ein Flächenverhältnis von 6/5 (normalschnell/langsam wandernde Albuminkomponente) aufwiesen. In der Immunelektrophorese-Untersuchung zeigte sich auch bei Verwendung von Serumverdünnungen und im Ansatz gegen verschiedene Antihumanseren und monospezifische Antialbuminseren stets nur eine typische symmetrisch gebogene Form der Albuminpräcipitationslinie. Beide Albuminkomponenten konnten mittels kombinierter präparativer Kartonelektrophorese und Säulenchromatographie jeweils in elektrophoretisch, immunelektrophoretisch und sedimentationsanalytisch reiner Form gewonnen werden. Sie zeigten ein annähernd gleich großes S20W um 4,5 und eine immunologische Identitätsreaktion. Die erhobenen Befunde werden den bisher in der Literatur beschriebenen Fällen gegenübergestellt. Der Begriff der Alloalbuminämie wird dem der Doppelalbuminämie übergeordnet, da er erlaubt, die heterowie homozygoten Fälle zusammenzufassen.

Notizen: Zusammenfassung Mit der radialen Immunodiffusionsmethode nachMancini wurden die IgG-, IgA-und IgM-Konzentrationen bei 55 Patienten mit verschiedenen Lebererkrankungen bestimmt. Die dabei erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 4 zusammengestellt. Das unterschiedliche Verhalten der Immunglobulinkonstellationen zwischen der akuten Hepatitis und der Lebercirrhose, vor allem der IgG-, IgA- und IgM-Konzentrationen ist signifikant. Bei der akuten Hepatitis nehmen die anfänglich stets erhöhten IgM innerhalb von 2–4 Wochen deutlich ab. Es besteht eine positive Korrelation zwischen der Stärke der Mesenchymproliferation und der IgA-und IgG-Konzentration sowie der Höhe der IgG/IgM-und IgA/IgM-Quotienten. Zwischen dem Ausmaß der Leberzellnekrosen und den Immunglobulinen sowie zwischen IgM-Konzentration und Thymolwert läßt sich keine Beziehung herstellen, ebensowenig zwischen dem Ig-Spiegel und der SGOT- und SGPT-Erhöhung. Die Veränderungen der Ig sind nicht leberoder krankheitsspezifisch. Die Untersuchung der Ig gibt jedoch im Rahmen des klinischen Gesamtbildes wertvolle Hinweise bei differentialdiagnostischen Überlegungen und für die Verlaufskontrolle zahlreicher akuter und chronischer Lebererkrankungen, besonders der Hepatitis und ihrer Folgezustände.

Notizen: Zusammenfassung Auf Grund der Erfahrungen mit Pferdeantihundelymphocytenseren wurden Immunseren vom Pferd gegen menschliche Lymphocyten hergestellt. 7 Pferde wurden bisher immunisiert: 4 mit Lymphocyten aus der Lymphe des Ductus thoracicus, je 1 Pferd mit Lymphocyten von Patienten mit Lymphadenose, mit Milzzellen und mit Thymushomogenaten. In vivo wurden bisher Seren gegen Ductus thoracicus-Lymphocyten und leukämische Lymphocyten erprobt. Einzelheiten der Antigengewinnung, Immunisierung und Präparation der Immunseren werden geschildert. Nach der in vitro-Testung im Leukoagglutinationstest, dessen Problematik geschildert wird, liegen die erreichten Titerhöhen zwischen 1:2000–1:64000.

Notizen: Zusammenfassung Nachdem ein hochwirksames Pferdeantihundelymphocytenserum (PAHLS) zur Verfügung stand, wurden Versuche zur Isolierung und Identifizierung der antikörperhaltigen Fraktionen bzw. Proteine aus diesem Serum durchgeführt. Zwei Methoden erwiesen sich als besonders geeignet: die Säulenchromatographie an DEAE-Cellulose bzw. an DEAE-Sephadex und die präparative Kartonelektrophorese. Es konnte festgestellt werden, daß dieγG-Globuline 3–4 Monate nach Immunisierungsbeginn die Hauptträger der Antikörper gegen Hunde-Lymphocyten sind. Die Wirksamkeit dieser elektrophoretisch, immunoelektrophoretisch als auch sedimentationsanalytisch in reiner Form gewonnenen Globuline wurde sowohl in vitro (durch Lymphagglutination) als auch in vivo (aufgrund eines lymphopenischen Effekts) getestet. Sie entsprach der Aktivität des Vollserums.