ISSN:
1432-072X
Quelle:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Thema:
Biologie
Beschreibung / Inhaltsverzeichnis:
Zusammenfassung Aus dem neu isolierten Arthrobacter Stamm 23 wurde Threonin-Desaminase 11fach angereichert. Das Enzym ist in einem Isoleucin, Pyridoxalphosphat, EDTA und Dithioerythrit enthaltenden Phosphatpuffer von pH 7,9 bei 4° C mehrere Tage lang ohne Aktivitätsverlust haltbar. Für das Enzym wurden Substratsättigungskurven ermittelt, die in Abwesenheit von Isoleucin hyperbolisch, in Gegenwart des negativen Effectors Isoleucin sigmoid verliefen. Der Hill-Koeffizient von n=1,95 deutet auf zwei substratbindende Zentren am Enzymprotein hin. Isoleucin verändert nur den K m-Wert, beeinflußt aber nicht die maximale Reaktionsgeschwindigkeit des Enzyms. Das Enzym wird nicht nur durch Isoleucin, sondern auch durch Valin, Norvalin, Norleucin und im geringen Maße auch durch Leucin und α-Aminobuttersäure gehemmt. Kurzkettige Aminosäuren wie Alanin oder α-Aminoisobuttersäure hemmen das Enzym auch in hohen Konzentrationen nicht. Die Hemmkinetiken mit Isoleucin, Valin, Norvalin und Norleucin verlaufen sigmoid. Die Hill-Koeffizienten deuten auf zwei Bindungsstellen für alle Inhibitoren hin. Antagonistische Effekte zwischen Isoleucin und Valin oder den anderen negativen Effectoren waren nicht zu beobachten. Aus den kinetischen Daten war weiterhin zu schließen, daß die negativen Effectoren Valin, Norvalin und Norleucin an den gleichen Bindungsstellen des Enzymes angreifen wie Isoleucin. Das Enzym läßt sich durch Entzug seiner Effectoren inaktivieren. Eine Reaktivierung gelingt mit Isoleucin, Valin und Threonin und den möglichen Kombinationen dieser Aminosäuren.
Notizen:
Summary Threonine deaminase (l-threonine hydro-lyase [deaminating], EC 4.2.1.16) has been partially purified (11-fold) from Arthrobacter strain 23 isolated recently in this laboratory. The enzyme is rather labile in the crude extract and in the partially purified state; in phosphate buffer pH 7.9 containing isoleucine, pyridoxal phosphate, EDTA and dithiothreitol at 4°C it can be kept for several days without loss of activity. The enzyme yielded substrate saturation curves which were hyperbolic unless the inhibitor isoleucine was present. Sigmoid saturation curves were obtained in the presence of isoleucine. The Hill-coefficient of n=1.95 indicates the enzyme to contain two substrate binding sites. Isoleucine changes the K m-value, but does not influence the maximal reaction velocity of the enzyme. The enzyme is not only inhibited by isoleucine, but also by valine, norvaline, norleucine and at a minor degree by leucine and α-aminobutyric acid. It is not inhibited by alanine or α-amino-isobutyric acid, even at high concentrations. Substrate saturation curves determined in the presence of isoleucine, valine, norvaline, and norleucine are sigmoid. The Hill-coefficients indicate the enzyme to contain two binding sites for the inhibitor. Antagonistic effects between isoleucine and valine or the other negative effectors have not been observed. From the kinetic data it can furthermore be concluded that the same binding sites are used by the negative effectors isoleucine, valine, norvaline, and norleucine. When being deprived of its effectors the enzyme becomes inactivated. A reactivation occurs when the enzyme is incubated in the presence of isoleucine, valine, or threonine or combinations of these amino acids.
Materialart:
Digitale Medien
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF00407693
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