ISSN:
1432-0428
Keywords:
Insulin
;
32P incorporation
;
adenine nucleotides
;
guanine nucleotides
;
Na+K+ ATP-ase
;
ouabain
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Medicine
Description / Table of Contents:
Résumé Le but de ces investigations a été de contribuer à la compréhension du mécanisme d'action de l'insuline, en provoquant un turn-over accru du phosphate inorganique marqué au32P, en ATP et autres mononucléotides, dans le diaphragme du rat. Pendant l'incubation du diaphragme intact de rat dans un milieu bicarbonaté de Krebs Ringer, sans addition de substrat, on n'a pas observé d'effet de l'insuline sur le contenu en adénine-nucléotides, en guanine-nucléotides, y compris le 3′5′ AMP cyclique et le 3′5′ GMP cyclique. Quand du phosphate inorganique radioactif marqué au32P était présent dans le milieu, l'insuline augmentait l'activité spécifique du phosphate inorganique intracellulaire et provoquait une incorporation accrue du32P dans l'ATP et le GTP. L'effet sur l'ADP était moins prononcé. Il a été montré que ces effets de l'insuline dépendent de la composition ionique du milieu et du transport membranaire des ions. L'augmentation due à l'insuline de l'activité spécifique du phosphate inorganique intracellulaire et du marquage accru au32P de l'ATP (et du GTP) était en grande partie inhibée par l'ouabaïne. Pendant l'incubation dans les milieux où le chlorure de sodium a été remplacé isoosmotiquement par le chlorure de potassium ou de choline, les effets de l'insuline décrits ci-dessus étaient abolis. Les résultats indiquent que le marquage accru de l'ATP (et du GTP) provoqué par l'insuline, peut être en premier lieu attribué à des phénomènes survenant au niveau de la membrane cellulaire. L'augmentation de l'activité spécifique du phosphate inorganique intracellulaire en présence d'insuline, peut s'expliquer par une captation accrue du phosphate inorganique marqué au32P, à partir du milieu. Apparemment le marquage accru au32P de l'ATP (et du GTP) est une conséquence secondaire. On suggère que cet effet de l'insuline est d'abord en rapport avec un effet sur les enzymes de la membrane, en particulier sur l'ATP-ase activée par Na+, K+ et Mg2+.
Abstract:
Zusammenfassung Ziel dieser Untersuchungen war es, zu einem besseren Verständnis der stimulierenden Wirkung von Insulin auf den Einbau von anorganischem32P Phosphat in ATP und andere Mononucleotide im Rattenzwerchfell beizutragen. Während der Inkubation intakter Rattenzwerchfelle in Krebs-Ringer-Bicarbonat Puffer ohne Substratzusatz konnte kein Insulineffekt auf den Gehalt an Adenonucleotiden und Guaninnucleotiden, sowie von cyclischem 3′,5′ AMP und cyclischem 3′,5′ GMP beobachtet werden. In Gegenwart von anorganischem32P Phosphat steigerte Insulin die spezifische Aktivität von intrazellulärem anorganischen Phosphat und bewirkte einen verstärkten Einbau von32P in ATP und GTP. Die Wirkung auf ADP war weniger ausgeprägt. Es konnte gezeigt werden, daß diese Insulineffekte von dem IonenGehalt des Mediums und dem Membrantransport der Ionen abhängen. Die Steigerung der spezifischen Aktivität des anorganischen Phosphates und der Markierung von ATP (und GTP) mit32P ließ sich weitgehend durch Ouabain wieder aufheben. Bei Inkubation in Pufferlösungen, die statt NaCl isoosmolare Mengen von KCl oder Cholinchlorid enthielten, waren die oben erwähnten Insulineffekte nicht mehr nachweisbar. Die Resultate sprechen dafür, daß die verstärkte Markierung von ATP (und GTP) unter Insulin in erster Linie auf Vorgängen an der Zellmembran beruht. Die erhöhte spezifische Aktivität des intrazellulären anorganischen Phosphates in Gegenwart von Insulin läßt sich durch einen verstärkten Einstrom von32P Phosphat aus dem Medium erklären. Augenscheinlich kommt es dadurch sekundär zu einer gesteigerten32P Markierung von ATP (und GTP). Wir möchten annehmen, daß dieser Insulineffekt vorwiegend über die Membranenzyme erfolgt und sich vor allem auf die Na+, K+ und Mg++ aktivierbare ATPase erstreckt.
Notes:
Summary The aim of these investigations has been to contribute to an understanding of the mechanism of action of insulin in promoting increased turn over of32P inorganic phosphate into ATP and other mononucleotides in the rat diaphragm. During incubation of the intact rat diaphragm in Krebs Ringer bicarbonate medium without addition of substrate, no effect of insulin on the content of adenine nucleotides and guanine nucleotides including cyclic 3′,5′ AMP and cyclic 3′,5′ GMP has been observed. When32P radioactive inorganic phosphate was present in the medium, insulin increased the specific activity of intracellular inorganic phosphate and promoted an increased incorporation of32P into ATP and GTP. The effect on ADP was less pronounced. It has been shown that these effects of insulin depend upon the ionic composition of the medium and on ion membrane-transport. The insulin-promoted increase of specific activity of intracellular inorganic phosphate and of increased32P labelling of ATP (and GTP) was to a great extent inhibited by ouabain. During incubation in media where sodium chloride had been iso-osmotically replaced by potassium chloride or choline chloride, the above mentioned effects by insulin were abolished. The results indicate that the increased labelling of ATP (and GTP) promoted by insulin can be primarily attributed to events occuring at the cell membrane. The increased specific activity of intracellular inorganic phosphate in the presence of insulin can be explained by increased uptake of32P inorganic phosphate from the medium. Apparently the increased32P labelling of ATP (and GTP) occur as a secondary consequence. It is suggested that this insulin effect is primarily concerned with an effect on membrane enzymes, particularly the Na+, K+, Mg2+ activated ATP-ase.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF01212001
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